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亚精胺对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响
目的以日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(Argyrophilic nucleolar organizer regionassociated proteins,AgNORs)为评价指标,探讨亚精胺(Spermidine,Spd)对培养细胞的促增殖作用.方法采用联合法将虫龄为24d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,培养于常规培养基中.接种后第3天,随机分为实验组和对照组.将实验组细胞用无血清培养基配制的终浓度为75 μmol/L的Spd处理48 h,对照组细胞则用不含Spd的无血清培养基处理,时间相同;PBS清洗3次后换用常规培养基继续培养.于第7、14、21、28、35天分别对培养细胞进行AgNORs染色.使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数及平均吸光值,并作统计分析.结果经Spd处理,各实验组培养细胞AgNORs着色明显深于对照组;但随着培养时间的延长,实验组与对照组细胞着色均逐渐变浅.各实验组细胞AgNORs颗粒数目与平均吸光值高于对照组,二者比较差异有统计学意义(u7=50.95、43.78;u14=55.23、43.54;u21=36.65、32.25;u28=31.6、32.95;u35=28.86、9.54;P＜0.01).各实验组AgNORs吸光值两两比较,除第7天与第14天之间差异无统计学意义外(q=0.008 058,P＞0.05),其余差异都有统计学意义(P＜0.01).结论Spd具有促进日本血吸虫培养细胞增殖的能力,每周用Spd处理培养细胞1次,能更大限度地促进血吸虫培养细胞的生长.
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雄虫抽提物对日本血吸虫卵黄培养细胞适浓度的筛选
目的 筛选雄虫抽提物对日本血吸虫卵黄培养细胞影响的适作用浓度.方法 灌注法获取28 d虫龄的日本血吸虫虫体,无菌处理后分离雌雄虫体.将雄虫匀浆,反复冻融3次,离心取上清液,考马斯亮蓝法测定蛋白后置于-20℃下保存备用.切下雌虫卵黄腺段虫体,冷消化法制备细胞悬液,调整细胞数为1×109/L后,将卵黄细胞接种于小盖玻片上,RPMI-1640含20%小牛血清培养,根据加入不同质量浓度雄虫抽提物分为6组(0、10、50、100、150、200 mg/L组).培养第7天,以核仁组织区相关嗜银蛋白(argyrophilic nucleolar organizer region associated proteins,AgNORs)及乳酸脱氢酶(1actate dehydrogenase,LDH)为评价指标,对卵黄细胞进行AgNORs及LDH染色,Olympus-BH2显微镜观察,输入HPIAS-2000图像分析仪测定培养细胞的灰度值.结果 随着雄虫抽提物质量浓度的增加,培养细胞的AgNORs与LDH着色均逐渐加深,至100 mg/L时深,随后又逐渐变浅.图像分析显示,雄虫抽提物处理的各组细胞AgNORs及LDH均明显高于对照组(q10=14.2189、q50=18.3358、q100=35.6491、q150=13.1849、q200=13.8604,P＜0.01;q10=10.3377、q50=11.7532、q100=23.1883、q150=10.2792、q200=9.3052,P＜0.01).雄虫抽提物100 mg/L组与其他各组比较,AgNORs及LDH明显升高(q10=21.4302、q50=17.3132、q150=22.4642、q200=21.7887,P＜0.01;q10=12.8506、q50=11.4351、q150=12.8896、q200=13.8831,P＜0.01).结论 雄虫抽提物可显著提高日本血吸虫卵黄细胞的增殖能力与代谢活性,其作用的适质量浓度为100 mg/L.
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急性非淋巴细胞白血病细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的研究
目的 研究核仁形成区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)对评估急性非淋巴细胞自血病(AML)细胞增殖分化水平的价值.方法 用嗜银染色方法检测AML细胞的嗜银颗粒数目和形态,观察Ag-NORs形态与细胞形态学之间的关系,Ag-NORs分数与染色体、荧光分子原位杂交(FISH)检查以及AML预后的关系.结果 不同Ag-NORs形状特征的细胞比例与细胞形态学的原幼稚细胞比例有显著相关性.Ag-NORs分数比较,染色体和FISH检查异常组高于正常组;治疗前未缓解组高于缓解组;持续缓解1年以上组高于1年内复发组;生存期1年以上组高于1年内死亡组(均P<0.01).结论 用嗜银染色方法检测AML细胞Ag-NORs分数和形态可观察白血病细胞的增殖状况,可作为白血病细胞动力学研究的一项指标,由于操作简便和易于普及,可为白血病的临床诊治提供快捷有效的实验依据.
关键词： 急性非淋巴细胞白血病 核仁组织区相关嗜银蛋白 嗜银颗粒数目和形态 预后 -
日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的研究
目的通过研究日本血吸虫成虫与童虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)含量及β-巯基乙醇对培养细胞AgNORs的影响,探讨AgNORs能否作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的指标以及β-巯基乙醇对培养细胞的促增殖作用.方法联合法培养虫龄分别为18d和24d的日本血吸虫童虫与成虫,将童虫细胞随机分成对照组和实验组,对照组细胞与成虫细胞使用常规培养基培养,实验组在常规培养基中加入50μmol/L β-巯基乙醇和1mmol/L丙酮酸钠.培养第5d,运用胶银法染色,使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数,测定银染颗粒面积与核面积的百分比和平均光密度.结果日本童虫培养细胞(对照组)的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均高于成虫培养细胞.统计学分析显示,两者之间的AgNORs颗粒数目,银染颗粒面积与核面积百分比、平均光密度两两比较均有统计学差异(P＜0.01或P＜0.05);实验组培养细胞与对照组比较,AgNORs颗粒数目明显增多颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均显著升高.统计学分析可知,两组细胞三组参数之间均有统计学差异(P＜0.01或P＜0.05).结论 AgNORs可作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的一个简便、敏感的指标.日本血吸虫童虫培养细胞较成虫培养细胞更具增殖潜能;β-巯基乙醇对培养细胞具有一定的促增殖作用.
关键词： 日本血吸虫 细胞培养 核仁组织区相关嗜银蛋白 β-巯基乙醇 -
条件培养基对日本血吸虫卵黄培养细胞Ag-NORs的影响
目的 以核仁组织区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)为评价指标,观察条件培养基对日本血吸虫卵黄培养细胞的影响.方法 灌注法获取28d虫龄的日本血吸虫虫体,雌雄分离后冷消化法制备细胞悬液,调细胞为1×106个/ml,联合法接种细胞.将接种于小盖玻片上的血吸虫卵黄细胞随机分为对照组和实验组2组.对照组用常规培养基即RPMI-1640含20％小牛血清附加常量抗生素(青霉素1×105U/L,链霉素100mg/L)培养,实验组培养基为常规培养基与培养的鼻咽癌细胞上清液的条件培养基1∶1的混合液.在培养的第7d、14d、21d、28d、35d时,定时对各组卵黄培养细胞进行Ag-NORs染色,光镜下观察、拍照,同时随机选取50个左右染色细胞输入HPIAS-2000图像分析仪测定Ag-NORs光密度值,并做统计分析.结果 培养第1～5周,实验组细胞Ag-NORs均深于对照组细胞；随着培养时间的延长,两组细胞核内着色颗粒均逐渐减少；两组培养细胞的Ag-NORs含量均逐渐降低,对照组下降较快,实验组下降较缓.相同培养时间比较,实验组培养细胞的Ag-NORs含量均显著高于对照组(P＜0.05).实验组细胞之间两两比较,除第21d与28d(P ＞0.05)无显著性差异外,其余各组差异均显著(P＜0.01)；对照组细胞之间两两比较,除第28d与35d外(P＞0.05),其余各组差异均显著.结论 条件培养基不仅可促进卵黄培养细胞的分裂增殖,而且能保持卵黄细胞在培养过程中的分裂增殖活性.
关键词： 日本血吸虫 条件培养基 卵黄细胞 核仁组织区相关嗜银蛋白
