首页 > 文献资料
-
D2蛋白酶间接ELISA检测方法的建立
目的 建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,为D2蛋白酶的进一步研究及应用奠定基础.方法 以纯化的D2蛋白酶为抗原,免疫新西兰白兔,制备D2蛋白酶多克隆抗体,建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用.结果 D2蛋白酶间接ELISA检测方法的佳反应条件为:一抗稀释度为1:64 000,二抗稀释度为1:80 000,抗原稀释度为1:100,饱和包被浓度为1 160 ng/ml,封闭剂为10%胎牛血清.标准曲线的线性检测范围为18～1 160 ng/ml.该方法准确性、重复性良好,特异性强、敏感性高,与琼脂扩散试验检测结果的符合率为95.5%.结论 已建立了D2蛋白酶间接ELISA检测方法,可用于D2蛋白酶含量的检测.
-
沙蚕消化道D2菌株胞外蛋白酶抗肿瘤活性的初步探讨
目的 研究沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶(D2蛋白酶)的抗肿瘤活性.方法 选用鼠乳腺癌细胞EMT6作为靶细胞,用不同浓度的D2蛋白酶,对体外培养靶细胞进行细胞增值抑制率检测,并与阳性对照组(紫杉醇组)和正常细胞对照组(人胚肺细胞组)比较.结果 与结论沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶对鼠乳腺癌细胞EMT6存在增殖抑制作用,显示出一定的抗肿瘤活性.
-
D2蛋白酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立
目的:建立一种定量测定D2蛋白酶的双抗体夹心ELISA方法.方法:用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限和定量限;检测该方法的准确性(回收率)、精密性和特异性,并与Bradford法检测结果进行比较.结果:包被抗体和捕获抗体的佳包被效价分别为1:4 000和1:5 000;检测的线性范围为(28～1180)μg/L,检测限为4.6μg/L.经方法学考核,批内、批间变异系数分别为5.64%和7.17%,回收率为92.44%～105.26%,与碱性蛋白酶、蛋白酶K等其他蛋白无交叉反应,与Bradford法检测结果具有良好的相关性.结论:该方法灵敏度高,重复性好,为后期D2蛋白酶规模发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法.
关键词： D2蛋白酶 ELISA双抗体夹心法 定量检测
