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EV71抗原ELISA定量检测方法的建立
目的 建立EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于EV71灭活疫苗生产过程中抗原含量的检测.方法 采用EV71全病毒免疫,制备抗EV71单克隆抗体及多克隆抗体,以抗EV71多克隆抗体作为包被抗体,经HRP标记的抗EV71单克隆抗体作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测样品中EV71抗原含量,并对该方法进行验证及应用.结果 所建立的方法线性范围为5～80 U/ml,R~2=0.994,线性关系良好,定量限度为5 U/ml;检测不同浓度的EV71抗原内部参考品,回收率为88%～119.0%;变异系数均小于15%;与甲肝病毒收获液、乙脑病毒灭活液、H5N1流感病毒裂解疫苗原液、小牛血清、人白蛋白、Veto细胞、MEM培养基及CoxA16收获液均无交叉反应;检测EV71灭活疫苗原液纯化过程样品的抗原含量,能有效反映抗原纯化趋势;检测铝吸附疫苗成品解离后抗原含量,准确性较高.结论 已建立了EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,该方法线性好,特异性强,灵敏度高,准确性及重复性良好,可用于EV71疫苗生产过程中及终产品的抗原定量检测.
关键词： EV71抗原 双抗体夹心ELISA 验证 -
EV71抗原BA-ELISA检测方法的建立及应用
目的 建立EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫(BA-ELISA)检测方法 ,并进行验证及初步应用.方法 以抗EV71抗体为包被抗体,利用生物素.亲和素系统建立双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证.采用该方法 检测组织培养及临床样品中EV71抗原的含量.结果 所建立的BA-ELlSA法在EV71蛋白含量625～156.25 ng/ml之间线性关系佳,R~2达0.9976,灵敏度为78.125～156.25 ng;与包括Cox A16在内的42种肠道病毒及相关病毒均无交叉反应;检测10份EV71阳性样品和10份阴性样品,结果 符合率均为100%;检测EV71原液和高、中浓度样品的变异系数分别为3.09%、6.69%和6.43%;可检出约10~3～10~4 CCID_(50),的活病毒及手足口病患者的大便悬液和部分咽拭子悬液中的病毒.结论 用生物素标记EV71抗体与亲和素系统建立的双抗体夹心ELISA法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,为临床检验及抗原分析提供了参考.
