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Mg2+和氨基酸对重组大肠杆菌BL21(DE3)生长及羧肽酶原B表达的影响
目的研究Mg2+和氨基酸对重组菌株生长及表达pCPB的影响.方法通过摇瓶和发酵罐培养,观察不同Mg2+浓度和氨基酸对重组菌的生长和羧肽酶原B表达的影响.结果添加1 g/L Mg2+能提高质粒的稳定性;添加氨基酸能使羧肽酶原B表达量由18.7 g/L提高到24 g/L.结论添加适量的Mg2+和氨基酸能促进重组菌的生长和提高目的蛋白的表达量.
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猪胰腺羧肽酶B提取工艺中的激活条件与稳定性研究
目的 研究猪胰腺羧肽酶B提取工艺中的激活条件以及激活后粗酶液的稳定性,并对酶进行纯化.方法 胰腺匀浆、激活,硫酸铵盐析进行初步提取,采用疏水色谱、离子交换色谱和分子筛等方法进行纯化,对胰腺匀浆后的粗酶激活条件进行了研究,考察了不同保存条件下粗酶液的稳定性.结果 纯化后的羧肽酶B经SDS-PAGE电泳鉴定为电泳纯.比活为152 u/mg,纯化过程的活性总回收率为51%.粗酶液中羧肽酶B的激活受各种条件影响,特别是激活温度和激活时间,4℃下激活80 h,或37℃下,激活6.5 h, 均可获得大酶活,激活后的粗酶液可直接于35%(NH4)2SO4中保存,保存60 h的酶活损失小于5%.结论 通过调整激活温度与激活时间可以获得猪胰腺羧肽酶B粗酶液大的激活效果,激活后的粗酶液可于35%(NH4)2SO4中短期保存.
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重组羧肽酶原B甲醇酵母的构建与分泌表达
目的 构建重组羧肽酶原B甲醇酵母工程菌株.方法 将羧肽酶原B编码基因整合入酵母质粒,电转化至甲醇酵母中,His缺陷培养基和G418抗性筛选获得阳性克隆株.用大肠杆菌表达的羧肽酶原B免疫家兔制备羧肽酶原B兔抗血清;经发酵、甲醇诱导后,蛋白质印迹(Western-blotting)免疫检测蛋白质的表达.结果 获得高抗体滴度的羧肽酶原B兔抗血清,蛋白质印迹免疫检测重组酵母经甲醇诱导表达后的上清阳性.结论 获得了重组羧肽酶原B甲醇酵母工程菌株,可分泌表达重组羧肽酶原B.
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凝血酶激活的纤溶抑制物及其抑制物的研究进展
凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)是一种含锌的金属羧肽酶原.TAFI通过消除部分降解的纤维蛋白上的赖氨酸残基,从而抑制纤维蛋白的进一步溶解.这一机理表明TAFI在纤维蛋白溶解及血栓溶解过程中具有重要的调节作用.对TAFI及其抑制物的深入研究可以为辅助溶栓药物的开发提供新的思路.
