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采用可溶性噻唑盐WST-8检测细胞病变
目的建立一种简便和客观的检测细胞病变的方法.方法活细胞代谢过程中,可溶性噻唑盐WST-8在电子载体1-Methoxy PMS存在时被还原形成的可溶性甲臜染料,通过读取A450-630间接检测活细胞的个数,可用于细胞病变的检测.将WST-8法用于rhIFN-α1b效价的检测,并与结晶紫法和常规镜检相比较.结果相关性研究表明在一定细胞浓度范围内(200～55 000细胞/孔)Wish活细胞个数与A450-630值呈线性相关,相关系数为0.998.WST-8法检测rhIFN-α1b的效价结果与结晶紫法和常规镜检结果基本一致,相关系数分别为0.911(P＜0.001)和0.945(P＜0.01).结论 WST-8法适用于以微量细胞病变法为基础的溶细胞型病毒滴度检测及抗肿瘤或抗病毒药物效果的检测.
关键词： WST-8 人重组干扰素IFN-α1b 细胞病变 -
人颗粒溶素基因真核表达载体的构建及在肝癌细胞中表达的实验研究
目的: 构建人颗粒溶素(GNLY) 全长编码序列的真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察GNLY在细胞内的表达及其对细胞增殖的抑制作用. 方法:用RT-PCR技术获取人GNLY 全长编码序列cDNA,克隆至pGEM-T 载体进行测序,再将克隆片段插入质粒pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY,用阳离子聚合物转染试剂转染肝癌细胞系SMMC-7721,检测目的基因mRNA的表达,WST-8法检测细胞增殖活性. 结果:获得人GNLY全长编码序列cDNA ,并成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY;转染SMMC-7721细胞后,检测出目的基因mRNA的表达;重组质粒转染组与空质粒对照组细胞增殖活性有非常显著性差异(P<0.01和P<0.001),并且随着转染基因浓度的增加,细胞增殖活性逐渐降低,2.0μg/ml pcDNA3.1(+)/GNLY转染组细胞增殖活性下降至0.329. 结论:pcDNA3.1(+)/GNLY真核表达载体构建成功,GNLY基因转染对SMMC-7721细胞能产生细胞毒性效应,对肝癌细胞具有一定的杀伤作用.
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昆布多糖硫酸酯对非激素依赖型人前列腺癌细胞PC-3的作用研究
目的 研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3的作用.方法 利用WST-8法检测LAMS对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3细胞生长的抑制作用,利用流式细胞术(FCM)分析LAMS对细胞周期和凋亡的影响,利用荧光显微镜观察PC-3细胞形态.结果 随着LAMS浓度的增加和作用时间的延长,对非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3细胞的生长抑制率逐渐增高,呈时间-剂量效应;流式细胞仪分析,PC-3细胞凋亡率逐渐增高;但PC-3细胞的凋亡率与作用时间的延长无明显关系;荧光显微镜观察,PC-3细胞凋亡小体逐渐增多,甚至出现细胞死亡;随着LAMS浓度增加PC-3细胞G1期细胞比例逐渐减少.S+G2期细胞比例呈剂量依赖性增加,表明存在S+G2期阻滞.结论 LAMS能抑制体外PC-3细胞的生长,并促进其S+G2期阻滞和凋亡,可能是其抑制前列腺癌的机制之一.
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异嗪皮啶对人乳腺癌干细胞凋亡相关基因Bcl-2与Caspase家族表达的影响
目的:研究草珊瑚中异嗪皮啶成分对乳腺癌干细胞中凋亡相关基因通路Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8基因表达影响,进而明确其抑制增殖、迁移和促凋亡的机制.方法:无血清培养法诱导MDA-MB-231细胞株富集乳腺癌干细胞,流式细胞仪分选CD44+/CD24-/low干细胞群.各组分别给予0、17、50、150、450μmol/L异嗪皮啶,CCK-8法观察给药后24、48、72 h的细胞活力;细胞划痕实验法检测给药后细胞痕道宽度变化值并判断其对细胞迁移能力的影响;Annexin V-FITC/PI染色法检测给药后细胞总凋亡率变化;实时荧光定量PCR测定各组Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8基因的mRNA水平;Western blot检测上述基因的蛋白水平.结果:与对照组比较,50、150和450μmol/L异嗪皮啶组24、48、72 h的细胞活力降低,细胞迁移能力下降.与对照组比较,50、150和450μmol/L异嗪皮啶组细胞总凋亡率高于对照组,Bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平降低,Caspase-3和Caspase-8基因mRNA和蛋白表达水平升高.以上结果均呈明显剂量效应关系.结论:异嗪皮啶能通过下调Bcl-2基因表达与激活Caspase基因家族诱导乳腺癌干细胞的凋亡,同时能抑制其增殖与迁移.
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WST-8检测培养小鼠脾NK细胞增殖及杀伤活性的研究
目的:采用WST-8检测培养小鼠脾NK细胞增殖活性,并探讨其杀伤活性.方法:采用WST-8检测体外培养的不同细胞数量的小鼠脾NK细胞增殖活性,并采用乳酸脱氢酶法检测其杀伤活性.结果:小鼠脾NK细胞在培养第3～5 d增殖旺盛,第5 d进入平台期.1×106/孔的细胞数检测较敏感.培养5 d的NK细胞杀伤活性随着效靶细胞比例的增加而增加,在效靶比为20∶1时,杀伤活性大.结论:WST-8是一种理想的检测小鼠脾NK细胞增殖活性的方法,但其对NK细胞的敏感性较低,培养的NK细胞在效靶比为20∶1时杀伤活性大.
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可溶性噻唑盐WST-8用于重组人白细胞介素-2的生物学活性测定
运用新型测定活细胞个数的化学物质,建立一种快速测定重组人白细胞介素-2生物学活性的方法.活细胞代谢过程中,胞内的可溶性噻唑盐WST-8在电子载体1-Methoxy PMS存在时被还原成可溶性甲臢染料,甲臢染料可在A45Onm处产生吸收值,根据其吸收值的大小间接检测活细胞个数从而测定待检测样品中IL-2的浓度水平.相关性实验结果证明,在细胞浓度1250～160000个/孔范围内,CTLL-2活细胞个数与A45O值之间呈线性相关;用此种新方法检测的白细胞介素-2(IL-2)生物学活性结果与MTT法及XTT法结果基本一致,相关系数分别为r=0.9602和r=0.9511.因此, WST-8法适用于悬浮依赖型细胞CTLL-2为基础的IL-2生物学活性检测,且具有经济、实用、简便、易行的特点,有较好的实际应用价值.
关键词： WST-8 重组人白细胞介素-2(rhIL-2) MTT法 XTT法
