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Stx2A-LHRH重组毒素对HeLa细胞毒性作用的探讨
Stx2A-LHRH重组毒素是本实验室构建、表达及纯化的,用XTT法检测、分析Stx2A-LHRH重组毒素对HeLa细胞的杀伤作用,为制备出治疗宫颈癌新的导向生物制剂打下基础.
关键词： Stx2A-LHRH 重组毒素 纯化 XTT法 -
问号钩端螺旋体毒力基因mviN的表达及细胞毒性作用研究
目的 克隆表达问号钩端螺旋体毒力基因mviN并观察表达产物对血管内皮细胞ECV304及肺上皮细胞A549的毒性作用.方法 将mviN基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-mviN,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨酸标签的Trx-MviN融合蛋白,并作亲和层析纯化.以XTT法检测毒力蛋白Trx-MviN对ECV304及A549细胞增殖的抑制作用,同时以流式细胞术检测其作用于ECV304及A549后的细胞凋亡率.结果 成功构建了重组质粒pE-mviN并高效表达出Trx-MviN融合蛋白;毒力蛋白Trx-MviN作用于ECV304及A549后,与对照组相比较,其细胞增殖被显著抑制(P＜0.05),而细胞凋亡率显著增加(P＜0.01).结论 重组质粒pET-mviN高效表达出Trx-MviN融合蛋白,纯化后的融合蛋白Trx-MviN对ECV304及A549具有细胞毒性作用.
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昆明山海棠总生物碱体外抗肿瘤作用的研究
目的:探讨昆明山海棠(THH)总生物碱对10种不同肿瘤细胞系的抑制作用,并筛选出敏感的肿瘤细胞系.方法:采用XTT法和SRB法对THH总生物碱体外抗肿瘤作用进行初步筛选.结果:THH总生物碱对10种不同肿瘤细胞系生长均有明显的抑制作用,而且对不同肿瘤细胞系抑制作用存显著差异和选择性.尤其是对人T细胞白血病细胞系MOLT-4、人T淋巴母细胞白血病细胞系Jurkat、小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10、人结肠腺癌细胞系SW-480抑制率均＞80%,其对应的IC50分别为13.59,24.10,30.05,31.39 mg·L-1.结论:THH总生物碱体外具有广泛,高效的抗肿瘤活性,可进一步探讨其作为抗肿瘤药物研究开发的价值.
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可溶性噻唑盐WST-8用于重组人白细胞介素-2的生物学活性测定
运用新型测定活细胞个数的化学物质,建立一种快速测定重组人白细胞介素-2生物学活性的方法.活细胞代谢过程中,胞内的可溶性噻唑盐WST-8在电子载体1-Methoxy PMS存在时被还原成可溶性甲臢染料,甲臢染料可在A45Onm处产生吸收值,根据其吸收值的大小间接检测活细胞个数从而测定待检测样品中IL-2的浓度水平.相关性实验结果证明,在细胞浓度1250～160000个/孔范围内,CTLL-2活细胞个数与A45O值之间呈线性相关;用此种新方法检测的白细胞介素-2(IL-2)生物学活性结果与MTT法及XTT法结果基本一致,相关系数分别为r=0.9602和r=0.9511.因此, WST-8法适用于悬浮依赖型细胞CTLL-2为基础的IL-2生物学活性检测,且具有经济、实用、简便、易行的特点,有较好的实际应用价值.
关键词： WST-8 重组人白细胞介素-2(rhIL-2) MTT法 XTT法
