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应用国产改良型DMEM培养基培养CHO-C28细胞
目的解决CHO-C28细胞在大规模培养过程中易增厚、脱落和不易维持的难题.方法试验组用国产改良型DMEM培养基连续培养CHO-C28细胞2个月,对照组用进口和国产DMEM培养基,观察细胞贴壁、增殖、维持和分泌HBAg情况.结果试验组细胞贴壁和长满单层时间明显快于对照组,维持2个月细胞未出现增厚和脱落,分泌tBsAg量明显高于对照组.结论使用国产改良型DMEM培养基培养CHO-C28细胞效果显著优于现用进口和国产DMEM培养基.
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pH值和新生牛血清浓度对CHO-C28细胞分泌HBsAg的影响
为解决CHO-C28细胞在大规模培养中易增厚、大片脱落、不易维持以及HBsAg滴度低的问题,对细胞培养液pH值和新生牛血清(NCS)浓度进行调整.结果表明,CHO-C28细胞在2个月维持时间内未出现明显增厚和大片脱落,HBsAg表达量明显提高.该实验为大规模培养CHO-C28细胞提供了依据.
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两种DMEM培养基培养CHO-C28细胞的研究
在同一实验条件下,比较了赛尔生物化工厂的DMEM培养基(国产DMEM)和Gibco公司的DMEM培养基(进口DMEM),在基因工程乙肝疫苗生产过程中,对细胞的生长状况、HBsAg的分泌、及纯化收率的影响.结果显示:国产DMEM更有利于重组(CHO)乙肝疫苗的大规模生产.
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重组CHO-C28细胞生长动态的研究
观察CHO-C28细胞在大生产过程中,生长状态曲线,为细胞培养过程中换液及培养条件提供依据.人为控制培养液中血清含量、加液量、pH值等条件.从生产种子22代左右开始传代,经5～6 d形成致密细胞单层,一般维持换液次数为30次左右.如果生产种子代次高,其维持换液次数也相应减少,根据不同换液次数细胞增殖数量不同,总结出重组CHO-C28细胞生长动态曲线.并根据换收液的HBsAg滴度,绘出换液次数和HBsAg相关曲线.结论:7～23次换液期间(缓慢生长期)HBsAg收获高.
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纤维连接蛋白(FN)对CHO-C28细胞生长的影响
纤维连接蛋白(FN)重要的功能是促进细胞的粘连、生长,因而对传代细胞的贴壁、增殖具有重要意义.试验通过观察不同含有FN的培养液对CHO-C28细胞的贴壁、集落形成、细胞增长速度的不同作用,比较FN对CHO-C28细胞的影响,同时对比进口与国产FN之间的区别.证明FN对克隆形成及细胞增殖有明显的促进作用,进口FN组和国产FN组无明显区别.
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重组CHO-C28细胞染色体鉴定方法的研究
分别采用五种不同条件鉴定重组CHO-C28 细胞染色体.对其影响因素如用秋水仙素处理时间的长短、固定液的使用方法等进行了试验,选择出了细胞分散好、染色体形态正常、边缘清晰、便于鉴定的两种佳条件.此方法操作简单、成功率高,适于CHO-C28 细胞染色体鉴定.
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生物反应器规模化培养重组CHO-C28细胞表达HBsAg的研究
应用新型聚酯纤维盘片,采用连续灌注培养方式,分别试验了细胞接种量、pH、DO、罐流速度等因素对CHO-C28细胞生长分泌HBsAg的影响,初步建立了5L生物反应器生产重组乙型肝炎疫苗的生产工艺.经3次试验培养,每次培养60d,较适宜的培养条件确定为: pH6.80～7.10, DO 20%～30%,温度36～37℃,灌流速度138ml/h,接种浓度1.9×106cell/ml.收获液的HBsAg平均滴度是1∶256,高滴度可达1∶512,纯化后的HBsAg产率为0.912mg/L.后对反应器培养工艺与现行的转瓶培养工艺进行了比较,生物反应器培养具有可控制培养条件、不易污染和可使HBsAg产率提高等优点.
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CHO-C28细胞收集液中乙型肝炎病毒表面抗原收率的研究
用CHO-C28细胞表达乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)生产基因工程乙肝疫苗,其产量受到CHO-C28细胞表达外源基因量的影响.本文通过CHO-C28细胞连续培养过程中表达(HBsAg)的参数、纯化过程中硫酸铵(A·S)饱和度、细胞收集液放置时间三个因素对RPHA滴度影响的研究结果表明:细胞收集液以45%饱和度的A·S沉淀HBsAg能获得较高的HBsAg收率,细胞收集液4℃放置时间不宜超过15 d,RPHA滴度在1:32～1:128之间的细胞收集液均可进入纯化流程进行纯化.
