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CD25抗体轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析
目的获得抗人CD25分子单抗的轻链及重链可变区基因,并进行序列分析.方法采用RTPCR,从WuTac细胞总RNA中扩增出轻链、重链可变区基因,进行克隆并作核苷酸序列分析.结果构建的PMD18-T-VL和PMD18-T-VH重组克隆载体,酶切与预期结果相符.VH和VL基因序列与鼠抗体的同源性大于80%.克隆的重链可变区基因长度为351bp,属于鼠重链Ⅲ(C)亚类.轻链可变区基因长度为324bp,属于鼠轻链Ⅳ亚类.结论本研究采用RT-PCT法扩增出轻链及重链可变区基因,并进行了序列测定和分析,为进一步构建嵌合抗体以及单链抗体奠定了基础.
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鼠抗CD4抗体轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析
为获得鼠抗人T细胞分化抗原4分子单抗的轻链及重链可变区基因.采用RT-PCR技术,从WuT4细胞总RNA中扩增出轻链和重链可变区基因,进行克隆并作核苷酸序列分析,发现RT-PCR扩增出来的两条轻链和一条重链可变区基因分别为400bp左右,构建的pMD18T-VL和pMD18T-VH重组克隆载体,酶切与预期结果相符.测序得到它们的DNA序列.结果表明,克隆的两条轻链可变区基因序列一致,长度均为324 bp,属于鼠轻链Ⅳ亚类.克隆的重链可变区基因长度为375 bp,属于鼠重链Ⅱ(C)亚类.
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鼠抗CD71单抗轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析
目的获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因.方法用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠重、轻链可变区的通用引物,通过PCR扩增基因,分别克隆入pMD18-T载体中,作核苷酸序列分析.结果用重链引物扩增获得长约350 bp的片段,用轻链引物扩增获得长约330bp的片段,序列测定获得它们的DNA序列.结论克隆的重链可变区基因长度为348 bp,属于小鼠H链可变区Ⅰ A亚组;克隆的轻链可变区基因长度为336 bp,属于小鼠κ轻链可变区Ⅱ亚组.
