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高效液相色谱法检测聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液中N-羟基琥珀酰亚胺含量
目的 建立检测聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEGylated recombinant human interferon oα2b,PEG-IFNα2b)注射液中N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxy succinimide,NHS)含量的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法.方法 以TSK G3000SW(7.8 mm×300 mm,10 μm,TOSOH)为色谱柱,用20 mmol/L PB(pH 7.0)-145 mmol/L NaCl-5％异丙醇为流动相,流速为0.6 ml/min,检测波长为260 nm,建立检测PEG-IFNα2b注射液中NHS含量的HPLC方法,进行专属性、系统适应性、准确性验证,并确定该方法的线性范围、定量限和低检测限.用建立的方法检测3批PEG-IFNα2b注射液中NHS的含量.结果 该方法专属性、系统适应性及准确性良好;线性范围为0.00 977～2.50 μg/ml (R2=0.999 985);低定量限为0.002 4 μg/ml (0.002％),低检测限为0.001 2 μtg/ml(0.001％).3批PEG-IFNα2b注射液样品中均未检出NHS,表明样品中NHS小于0.001％.结论 建立的HPLC法准确、可靠,可用于PEG-IFNα2b注射液中NHS含量的测定.
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经碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺交联的Ⅱ型胶原海绵的制备
[目的]用碳化二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethyl ami-nopropyl)carbodiimide,EDC]/N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)对Ⅱ型胶原海绵进行交联,评价了交联前后材料理化性能的改变,探讨其在软骨组织工程方面应用的可行性.[方法]提取Ⅱ型胶原后,通过真空冷冻干燥法冻干成多孔海绵材料后,室温下交联24 h,再次冻于成为Ⅱ型胶原海绵支架材料.采用激光共聚焦显微镜、扫描电镜、拉力测试机等手段对海绵材料的结构及性能进行分析.将绿色荧光蛋白(CFP)标记的兔软骨细胞种植到交联后的Ⅱ型胶原支架材料后,观察细胞生长状况.[结果](1)交联后的海绵材料的力学性能与未交联组相比明显提高,达到(2.18±0.47)MPa;(2)交联组材料的抗胶原酶降解能力显著提高,4 h后仅降解了8.28%.交联后孔径大小约为90 μm,孔隙率和平衡含水率平均为93.39%和97.78%;(3)软骨细胞在Ⅱ型胶原海绵上生长状况良好.[结论]交联后的Ⅱ型胶原海绵保持其优良的理化特性和生物相容性,同时又有效地提高了力学性能和抗降解能力.
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柠檬酸-EDC/NHS胶原凝胶修复破损纤维环
目的 探讨利用柠檬酸-EDC/NHS一型胶原凝胶修复纤维环损伤,减缓椎间盘退变的效果.方法 使用鼠尾肌腱一型胶原凝胶,柠檬酸(CA)、1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)作为交联剂,将一型胶原凝胶与交联剂按不同质量比混合制成一型胶原混合凝胶.建立鼠尾椎间盘纤维环穿刺模型.清洁级SD大鼠48只,分为假手术组(n=8)、CA-EDC/NHS凝胶(CA6)治疗组(n=10)、CA-EDC/NHS凝胶(CA3)治疗组(n=10)、EDC/NHS凝胶(CA0)治疗组(n=10)、穿刺未治疗组(n=1O).分别于1、2、4周行小动物X摄片、小动物MRI检查,统计分析不同时间点椎间隙高度系数、髓核像素值及Pfirrmann分级,于第4周时将大鼠处死行组织学切片观察.结果 4周后,CA-EDC/NHS凝胶(CA6)治疗组的鼠尾椎间盘对比假手术组仅发生了轻微的退变,基本保持了髓核组织的完整性,在椎间盘高度系数(均数79％)、髓核像素值(均数126.9)和Pfirrmann分级结果(平均1.3分)均优于其余两个治疗组和穿刺未治疗组(P＜0.05).CA-EDC/NHS凝胶(CA6)治疗组的组织学观察显示,针道的周围没有发现炎性细胞浸润和瘢痕组织,针道尽头可见一团凝胶状物质在断裂的纤维环组织之间形成了桥接使其闭合.结论 柠檬酸-EDC/NHS胶原凝胶具有一定的修复破损纤维环,减缓椎间盘退变的能力,并且与柠檬酸剂量存在相关性.
