首页 > 文献资料
-
重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性检测方法的建立及验证
目的 建立重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性的检测方法,并进行验证.方法 测定3种人淋巴瘤细胞(MC/CAR、HUT78、RAMOS)CD52抗原的表达率,选择CD52表达率高的作为靶细胞.以系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体的参比品和供试品作用表达CD52抗原的人淋巴瘤细胞,FITC标记的兔抗人IgG结合人淋巴瘤细胞上的重组人源化抗CD52单克隆抗体,流式细胞分析仪测定几何荧光均数.通过四参数方程拟合,计算参比品和供试品的半数有效浓度(EC50)及相对结合活性.并对该方法的专属性、准确性、精密性、线性范围和耐用性进行验证.结果 淋巴瘤MC/CAR细胞CD52抗原表达率高,确定该细胞为靶细胞.CD52抗原与无关抗体不存在特异性结合;重复3次测定不同理论相对结合活性人源化抗CD52单克隆抗体参比品的回收率在97.4％～111.9％之间,相对结合活性及回收率的RSD值均在10％以内;同一实验人员于同一天6次重复检测重组人源化抗CD52单克隆抗体相对结合活性在86.93％ ～ 114.42％之间,RSD值在10％以内,3d内不同实验员分别检测5个效价样品的相对结合活性的RSD在20％以内;在重组人源化抗CD52单克隆抗体理论效价50％～150％范围内,与相对结合活性呈良好的线性,线性回归方程为y=1.0452x-1.082,R2为0.992 1;MC/CAR细胞在第28代时仍适用于抗CD52抗体相对结合活性的测定.结论 该方法具有良好的特异性、准确性、精密性、线性和耐用性,且操作简便,可用于重组抗CD52抗体抗原结合活性的常规检测.
-
前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体抗原结合活性间接ELISA测定方法的建立
目的 建立前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)单克隆抗体抗原结合活性的间接ELISA测定方法.方法 利用链酶亲和素-生物素系统捕获包被PCSK9蛋白,采用间接ELISA法检测PCSK9单抗参比品和供试品,通过拟合四参数方程Y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D,得出两者的半数有效浓度(concentration for 50％ of maximal effect,EC50),计算供试品的抗原结合活性.同时验证该方法的专属性和精密性.结果 PCSK9单抗参比品、供试品及Evolocumab(Amgen)的曲线均呈显著的剂量依赖关系,符合四参数方程,且R2＞0.99;抗CD115抗体及空白稀释液不存在类似的剂量效应曲线;重复性、人员及日间精密性的相对标准偏差(relativestandard deviatin,RSD)分别为7.5％、11.3％和10.4％,均＜15％.结论 成功建立了抗PCSK9单抗抗原结合活性的间接ELISA检测方法,该方法专属性和精密度良好,可用于PCSK9单抗抗原结合活性的常规测定.
关键词： 前蛋白转化酶枯草溶菌素9 单克隆抗体 抗原结合活性 酶联免疫吸附试验 -
重组人源化兔抗血管内皮生长因子单克隆抗体的抗原结合活性测定
目的 采用直接ELISA法测定重组人源化兔抗血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体的抗原结合活性.方法 以VEGF-Fc为包被抗原,采用直接ELISA法测定不同浓度重组人源化兔抗vEGF单扰参考品和供试品与抗原的结合活性,根据供试品及参考品的EC50值计算供试品的相对结合力,并分析该法的精密性.结果 重组人源化兔抗VEGF单抗供试品及参考品的抗原结合均存在量效关系,且符合四参数方程.同一批次的供试品单抗原液的相对结合活性分别为参考品的(90.43±18.74)%、( 123.56±18.40)%和(106.83±18.47)%,均值为(106.94±16.57)%.3次试验的变异系数分别为20.72%、14.89%和17.29%.同一批次的供试品成品的相对结合活性分别为(97.34±18.42)%、( 123.30±11.08)%和(93.91±4.57)%,变异系数分别为18.93%、8.96%和4.87%.结论 直接ELISA法精密性良好,操作简便,可用于重组人源化兔抗VEGF单抗抗原结合活性的常规检测.
-
含有E tag的抗结肠癌相关抗原单链抗体的研制
在已构建的抗结肠癌相关抗原单链抗体基因的基础上,为方便其活性测定,设计了含有E tag的引物进行PCR扩增,以scFv-E tag融合基因的形式构建在质粒pET-22b(+)中,并在大肠杆菌中进行了表达.对表达产物的主要成分包涵体进行了变性、复性,ELISA及免疫组化SABC法对该单链抗体进行活性测定,结果表明它具有与原代单克隆抗体相似的抗原结合活性及组织特异性.
