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缺氧抑制脑动脉Kv2.1通道作用机制的研究
目的 探讨缺氧对脑动脉Kv通道抑制作用的机制是否由内源性15-羟二十碳四烯酸(15-HETE)介导.方法 选取健康Wistar大鼠,通过酶法分离培养脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞,分为正常对照组、缺氧组和去甲二氢愈创木酸(NDGA)缺氧组,正常对照组平滑肌细胞常规培养48h、缺氧组在缺氧箱内培养48h、NDGA缺氧组加入50μmol/L的NDGA后在缺氧箱内培养48h,使用RT-PCR和Western blotting技术检测大鼠脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞上Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达情况.结果 缺氧可以抑制大鼠脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞上Kv2.1通道的表达,缺氧组与正常对照组相比,Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达下调(P<0.05);采用NDGA抑制15-脂氧化酶(15-LOX)后,导致脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞上Kv2.1通道的表达上调,NDGA可以保护缺氧对于Kv通道的抑制,NDGA缺氧组与缺氧组相比,Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达明显上调(P<0.05).结论 缺氧可能通过内源性15-HETE发挥对Kv通道的抑制作用,15-HETE可能是影响脑动脉张力的重要中介因素.
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NDGA对HT-29结肠癌细胞生长抑制及对端粒酶表达影响的研究
目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA在体外对结肠癌HT-29细胞株生长抑制、诱导凋亡,并对端粒酶表达的影响进行研究.方法:应用MTT法绘制生长曲线,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;扫描电镜观察细胞超微结构变化,观察凋亡小体;RT-PCR检测端粒酶催化活性亚单位(hTERT)表达水平变化.结果:不同浓度NDGA处理HT-29结肠癌细胞,随着药物浓度加大,细胞形态变圆,体积缩小,从瓶壁上逐步脱落,肿瘤细胞生长抑制.应用扫描电镜可见凋亡小体形成.对照组结肠癌HT-29细胞hTERT mRNA呈阳性表达,随着药物浓度上升,hTERT mRNA表达水平逐步下降.结论:NDGA对结肠癌HT-29细胞具有抑制生长、诱导凋亡作用,并且具有剂量依赖效应.端粒酶参与其诱导凋亡的过程.
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去甲二氢愈创木酸宫腔灌注对大鼠胚胎的影响
目的 探讨去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid, NDGA)对大鼠早期胚胎及子宫蜕膜发育的影响,为计划生育新药研究奠定基础.方法 在大鼠妊娠第1、7天(E1和E7)分别宫腔内插管灌注NDGA,观察第9天的胚胎种植数、血清孕酮值和胚胎直径及足月胎鼠的数目和体质量,检测子宫蜕膜和胎盘中内皮细胞生长因子VEGF和增殖细胞核抗原PCNA的表达,测量微血管密度(MVD).结果 E1给药后,NDGA各组灌注侧的胚胎数较对侧减少(P＜0.05),胚胎直径显著减小(P＜0.05),足月胎鼠数较对侧减少(P＜0.05);E7给药后,胚胎直径减小(P＜0.05);E1给药比在E7给药的胚胎直径减小更有显著性(P＜0.01);蜕膜和胎盘中VEGF和PCNA表达显著减少,平均光密度值显著减小(P＜0.01),MVD显著减少(P＜0.01);血清孕酮值与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).结论 宫腔灌注NDGA对大鼠早期胚胎和蜕膜的发育有明显抑制作用,对大鼠血清孕酮值无明显影响.
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去甲二氢愈创木酸对大鼠早期胚胎的影响
目的 探讨去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对大鼠早期胚胎及子宫蜕膜发育的影响.方法 在大鼠妊娠第1、7、14天(E1、E7和E14)分别皮下注射NDGA和PBS液,观察在妊娠第6、9天的胚胎种植数、胚胎直径及新生鼠的数目和体质量,检测子宫蜕膜中内皮细胞生长因子VEGF和增殖细胞核抗原PCNA的表达,测量微血管密度(MVD),检测妊娠第9天的血清孕酮值. 结果 E1给药后,NDGA各组的胚胎种植总数显著减少(P<0.05),胚胎直径显著减小(P<0.05);E7给药后, 胚胎直径显著减小(P<0.05);E1和E7给药后新生鼠总数减少 (P<0.05),体质量无显著性差异(P>0.05);蜕膜中VEGF和PCNA表达显著减少, MVD减少(P<0.05);血清孕酮值与对照组比较无显著性差异(P>0.05). E14组新生鼠数目和体质量在各组间差异无统计学意义(P>0.05). 结论 NDGA对大鼠早期胚胎和蜕膜的发育有明显抑制作用,对大鼠的晚孕胚胎无明显影响.
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脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响
目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响.方法:采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达.结果:NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol/L的NDGA处理后G0/G1期细胞减少(P＜0.05)、S期细胞增多(P＜0.05),G2/M期细胞无明显变化;细胞经100μmol/L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调(P＜0.01)、bax蛋白与对照组相比表达上调(P＜0.01).结论:NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关.
