首页 > 文献资料
-
H2 S对外源性LY294002预处理人结肠癌细胞凋亡的影响
目的 研究H2 S对体外培养人结肠癌细胞凋亡的影响及其机制.方法 体外培养人结肠癌细胞,随机分为正常对照组、NaHS(100μmol/L)组、LY294002(2μg/ml)组、NaHS(100μmol/L)+LY294002(2μg/ml)组,采用流式细胞术检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞凋亡的影响,Western印迹检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞中磷酸化Akt、非磷酸化GSK-3β蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,NaHS组人结肠癌细胞凋亡显著降低,p-Akt蛋白表达显著增加,而GSK-3β蛋白表达显著降低(均P<0.01).LY294002组人结肠癌细胞凋亡显著增加,p-Akt蛋白表达显著降低,而GSK-3β蛋白表达均显著增加(均P<0.01).而与NaHS组比较,NaHS+LY294002组人结肠癌细胞凋亡显著增加,p-Akt蛋白表达显著降低,而GSK-3β蛋白表达显著增加(均P<0.01).结论 PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能介导参与了H2 S对人结肠癌细胞凋亡的抑制作用.
关键词： 结肠癌细胞 硫化氢 细胞凋亡 PI3K/Akt/GSK-3β信号通路 -
PI3K/AKT/GSK-3β信号通路在转录后水平调控ICAM-1的表达
目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号通路调控脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及其机制.方法 ①LPS(10 mg/L)刺激HUVEC0、6、12、24h或者0、4、8、12 h或者0、30、60、120 min后,Western blot检测ICAM-1、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、GSK-3β和p-GSK-3β的表达,实时荧光定量PCR (qPCR)检测ICAM-1 mRNA的表达.②将PI3K、AKT和GSK-3β的siRNA分别转染HUVEC,转染浓度梯度为40、80和100nmol/L,对照组转染control siRNA,Western blot检测PI3K、AKT和GSK-3β总蛋白的表达.③将PI3K、AKT和GSK-3β的siRNA分别转染HUVEC,对照组转染control siRNA,LPS刺激细胞30 min、1h、8h和12 h,Western blot检测p-AKT、p-GSK-3β和ICAM-1的表达,qPCR检测ICAM-1 mRNA的表达.④转染方法同上,LPS刺激HUVEC 8 h后加入放线菌素D(ActD)5 mg/L抑制转录,于0、1、2、3和4h收集细胞,qPCR检测ICAM-1mRNA的表达并计算mRNA的半衰期.结果 ①LPS刺激HUVEC后ICAM-1的表达12 h达高峰,与其他时间点有显著差异(P＜0.05或P＜0.01);LPS刺激HUVEC后ICAM-1 mRNA的表达8h达高峰,与其他时间点有显著差异(P ＜0.05或P＜0.01);LPS刺激HUVEC后PI3K、AKT和GSK-3β蛋白的磷酸化水平分别在刺激30min、1h和1h后达高峰.②PI3K、AKT和GSK-3β转染组的适转染浓度为100 nmol/L.③PI3K转染组的p-AKT和p-GSK-3β表达显著下降(P＜0.01),AKT转染组p-GSK-3β表达显著下降(P ＜0.01);PI3K和AKT转染组的ICAM-1的蛋白和mRNA表达均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),相反GSK-3β转染组ICAM-1的蛋白和mRNA表达均显著下降(P＜0.01).④PI3K、AKT的沉默表达显著延长ICAM-1的mRNA半衰期(P＜0.01),相反GSK-3β的沉默表达显著缩短ICAM-1的mRNA半衰期(P＜0.01).结论 LPS通过激活PI3K/AKT/GSK-3β信号通路负向调控HUVEC表达ICAM-1.PI3K、AKT和GSK-3β在转录后水平调控ICAM-1mRNA的稳定性.
-
远志汤有效成分对APP/PS1小鼠氧化损伤的保护作用机制研究
目的 通过观察远志汤有效成分即 β-细辛醚+远志皂苷(TEN)对APP/PS1双转基因小鼠磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成激酶3β(GSK-3β)信号通路的调控,探讨远志汤防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制.方法 将3月龄APP/PS1双转基因小鼠分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.33 mg/kg·d)、β-细辛醚+TEN低、中和高剂量组[18.5、37.0和74.0 mg/(kg·d)],选同月龄C57BL/6小鼠为空白对照组,采用Morris水迷宫法和新物体识别实验检测小鼠的学习记忆能力,采用分光光度法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活性,以及丙二醛(MDA)含量.采用Western blot检测GSK-3β、Akt,以及两者磷酸化蛋白表达.结果 β-细辛醚协同TEN可增强APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆功能,同时还能升高SOD、CAT和GSH-PX的活性,降低MDA含量,诱导Akt的蛋白表达,抑制GSK-3β 的表达.结论 远志汤有效成分即 β-细辛醚+TEN可通过调控PI3K/Akt/GSK-3β 信号通路,对APP/PS1双转基因小鼠氧化应激损伤发挥保护作用.
-
CK2α通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调控肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移
背景与目的 肺癌已成为全球癌症死亡的首要原因,而侵袭和转移是导致肿瘤死亡的主要原因之一,蛋白激酶CK2是一种高度保守信使非依赖性丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,其在各种肿瘤中高表达.本研究旨在探讨下调CK2α基因表达对肺腺癌A549细胞侵袭迁移的影响以及可能的机制.方法 构建pSilencerTM4.1-shCK2α-eGFP慢病毒表达载体,建立稳定干扰CK2α表达的A549细胞株.利用Transwell和Boyden小室实验检测干扰CK2α表达前后A549细胞的侵袭及迁移的能力.Western blot检测PI3K/Akt信号通路和上皮-间充质转化(mesenchymal-to-epithelial transition,EMT)相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,干扰CK2α表达后肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移能力明显下降,p-PTEN、Akt、p-Akt473、p-Akt308、p-PDK1、p-c-Raf、p-GSK-3p蛋白明显下调,PTEN蛋白表达水平显著上调.上皮-间充质转化的相关蛋白E-cadherin蛋白表达水平显著上调,而Vi-mentin、p-catenin、Snail蛋白表达水平显著下调,与侵袭转移相关蛋白的MMP2、MMP9表达水平显著下调.结论 CK2α可能通过PI3K/Akt/GSK-3p/Snail信号通路来调控上皮-间充质转化参与肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移.
