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三羟基异黄酮对转染APP695基因PC12细胞凋亡和功能的影响
目的 以APP695MT基因转染PC12细胞为细胞模型,研究三羟基异黄酮(GST)对模型细胞凋亡和功能的影响.方法 用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2 -EGFP/APP695 MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、APP695转染组、GST干预组.应用激光共聚焦显微技术检测PC12细胞凋亡率,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量.结果 APP695转染组与对照组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),CA分泌量明显降低(P＜0.01)；GST干预组与APP695转染组比较细胞凋亡率降低(P＜0.01),CA分泌量均明显增加(P＜0.01).结论 GST可降低A PP695 MT基因转染引起的PC12细胞凋亡率,同时也可提高CA的分泌量,对转染细胞有一定的保护作用,并能改善其生理功能.
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三羟基异黄酮对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用
目的 探讨植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用及机制.方法 用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、APP695转染组、GST干预组.应用流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫细胞化学SABC法和Western blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的表达.结果 APP695转染组与空载组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3为强阳性表达(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较,PC12细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Caspase-3的免疫反应产物明显减弱(P<0.01),且15 μmol·L-1和20 μmol·L-1 GST处理组与5 μmol·L-1和10 μmol·L-1 GST处理组比较,Caspase-3的免疫反应产物减弱更明显(P<0.01).结论 GST能降低APP695基因转染的PC12细胞凋亡率,其机制可能与减少凋亡蛋白Caspase-3的表达有关.
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Genistein对APP695转染PC12细胞凋亡的保护作用
目的 观察Genistein(GST)对APP695转染PC12细胞凋亡的保护作用.方法 将培养的PC12细胞分为正常对照组、APP695转染组、GST干预组.采用流式细胞术检测PC12细胞凋亡率.结果 APP695转染组与正常对照组比较,PC12细胞存活率明显降低,凋亡率明显升高(P＜0.01).GST干预组与APP695转染组比较,细胞存活率显著升高,凋亡率显著降低,其中1μmol/L GST组与APP695转染组比较,细胞凋亡率降低(P＜0.05),5μmol/L GST组较APP695转染组细胞凋亡率则明显降低(P＜0.01).结论 GST对APP695基因转染引起的PC12细胞损伤有一定的保护作用.
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三羟基异黄酮对APP695基因转染PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响
目的 观察植物雌激素三羟基异黄酮(genistein,GST)对APP695基因转染PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.方法 用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695 MT表达载体转染正常PC12细胞,将细胞分为正常对照组、空载转染组、APP695转染组和GST干预组(5μmol/L、15 μmol/L).采用免疫细胞化学SABC法和免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2在PC12细胞中的表达.结果 免疫细胞化学SABC法结果显示,与正常对照组比较,APP695转染组PC12细胞Bax蛋白细胞阳性表达率显著升高[(78.02±1.26)％,P＜0.01)],Bcl-2蛋白细胞阳性表达率则明显降低[(15.40±0.72)％,P＜0.01)]；15 μmol/L GST组与APP695转染组比较,Bax蛋白的阳性细胞表达率显著降低[(22.35±0.49)％,P＜0.01)],而Bcl-2蛋白的阳性表达率明显增强[(68.11±0.24)％,P＜0.01)].Western blot结果表明,APP695转染组与对照组比较Bax蛋白的表达量明显增多,Bcl-2蛋白表达则明显降低；GST各处理组与APP695转染组比较,Bax蛋白的表达量明显降低,Bcl-2蛋白表达显著增强.结论 GST能降低APP695基因转染引起的PC12细胞内Bax蛋白表达的水平,而提高Bcl-2蛋白的表达水平,对PC12细胞产生保护作用.
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三羟基异黄酮对转染APP695基因PC12细胞周期和凋亡的影响
目的 以APP695MT基因转染PC12细胞为细胞模型,研究三羟基异黄酮(Genistein,GST)对模型细胞周期和凋亡的影响.方法 用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695 MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为空载对照组、APP695转染组、GST干预组.应用流式细胞仪测定检测细胞周期和细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态学变化.结果 APP695转染组与空载对照组比较,PC12细胞在G0和G1期明显增多,而进入S期的细胞减少,细胞增殖指数明显降低[(55.6±0.57)％,P＜0.01],细胞凋亡率明显升高[(77.10±12.53)％,P＜0.01]；细胞死亡发出的红色荧光明显增多,胞体肿胀,细胞器崩解,细胞核固缩或碎裂.GST( 15 μmol/L)干预组与APP695转染组比较,PC12细胞在Go和G1期明显减少,而进入S期的细胞增多,细胞增殖指数明显增加[ (61.57±0.47)％,P＜0.01],细胞凋亡率降低[(46.00±8.43)％,P＜0.01]；细胞死亡发出的红色荧光明显减少,绿色荧光显著增强,细胞形态较APP695转染组好转.结论 GST能改善APP695MT基因转染引起的细胞周期阻滞,促进细胞向S期的过渡,降低PC12细胞凋亡率,对转染细胞有一定的保护作用.
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GST对转染APP695基因PC12细胞β淀粉样蛋白表达和形态功能的影响
目的:观察三羟基异黄酮( Genistein,GST)对APP695转染PC12细胞β淀粉样蛋白(Aβ)表达和形态功能的影响.方法:用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695 MT表达载体转染正常的PC12细胞,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导PC12细胞72 h后,放射免疫法测定Aβ的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞形态学的变化,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量.结果:APP695转染组与对照组比较Aβ生成量明显增加(P＜0.01),细胞突起数量少、突起长度较短,CA分泌量明显降低(P＜0.01)；GST干预组与APP695转染组比较Aβ生成量减少(P＜0.05),细胞突起数量增多、突起较长,CA分泌量明显增加(P＜0.01).结论:GST能减少APP695基因转染引起的PC12细胞Aβ的表达,改善细胞分化程度,提高CA的分泌量,对转染PC12细胞具有一定的保护作用.
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GST对转染APP695基因PC12细胞形态和增殖能力的影响
目的:观察APP695MT基因转染对PC12细胞形态和增殖能力的影响及植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)的干预作用,初步探讨GST对表达APP695MT基因PC12细胞的保护作用.方法:以pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常PC12细胞,电镜观察各组细胞形态学改变,细胞计数方法检测各组细胞增殖能力差异.结果:电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变；APP695转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集；GST干预组较APP695转染组细胞形态明显改善,线粒体髓样变和空泡样变明显减少,胞核陷明显减轻.细胞计数结果显示,在各细胞计数时间点,与正常对照组比较,空载组细胞数目无显著变化(P＞0.05),APP695转染组PC12细胞数目减少(P＜0.01),细胞生长增殖能力明显受到抑制；GST各剂量处理组与APP695转染组比较细胞生长增殖能力均有不同程度的增强(P＜0.01).结论:GST能改善突变型APP695基因转染引起的PC12细胞病理变化,并提高其增殖能力,对转染细胞有一定的保护作用.
