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金丝桃苷对HL7702细胞氧化损伤的保护作用及机制
目的 研究金丝桃苷对人正常肝细胞HL7702氧化损伤的保护作用及作用机制.方法 采用乙醇诱导建立氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率,利用相关试剂盒检测ROS、SOD、MDA、GSH水平,rhodamine 123染色考察线粒体膜电位的变化,PI染色检测细胞凋亡程度,以及Western blot评价线粒体途径相关蛋白表达.结果 确定100 mmol· L-1乙醇为适宜浓度建立氧化损伤模型,形态学观察发现细胞变圆并悬浮于培养液中,PI染色显示细胞发生凋亡.100 μmol· L-1金丝桃苷能够降低乙醇诱导的HL7702细胞中MDA的产生,提高SOD活力.同时,使促凋亡蛋白Bax、细胞色素c(cytochrome c)、caspase 3蛋白表达降低,增加抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达.结论 金丝桃苷可以保护乙醇诱导的肝细胞氧化损伤,其作用机制可能与抑制线粒体途径凋亡相关.
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胶原蛋白肽经由Nrf2信号通路对H2O2诱导的肝细胞氧化损伤的保护作用
目的:氧化应激在肝脏疾病中扮演着重要的角色.胶原蛋白肽是天然的抗氧化剂,其在动物实验中已经被证实有抑制氧化应激的作用.新研究证实胶原蛋白肽将有可能被应用在肝脏疾病的预防中,但是很少有研究报道其分子作用机制.因此本研究在胶原蛋白肽是对H2O2诱导的正常人的肝细胞系HL7702氧化损伤有保护作用的基础上,并探索其分子作用机制.方法:实验设空白对照组,H2O2模型组,胶原蛋白肽低、中、高剂量组(10,100,200μg/ml).胶原蛋白肽各组加入相应浓度的药物预处理12h后,与模型组一起加入300 μMH2O2的H2O2共同培养12h,空白对照组正常培养.细胞毒性是由CCK8和乳酸脱氢酶(LDH)的释放检测.抗氧化试剂盒检测细胞内活性氧的水平,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量的变化.Western blot检测细胞内Nrf2蛋白的表达水平.结果:胶原蛋白肽对H2O2诱导的正常人的肝细胞系HL7702氧化损伤有保护作用.胶原蛋白肽能够及时清除细胞内的活性氧,增加Nrf2的蛋白表达水平,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性,减轻脂质过氧化反应,从而保护正常人的肝细胞系HL7702.结论:总之,胶原蛋白肽通过增加Nrf2的蛋白表达水平,提高抗氧化活性,对H2O2诱导损伤的肝细胞发挥保护作用.本研究为胶原蛋白肽的分子作用机制提供了新的证据,将有助于预防氧化应激所致的肝损伤.
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乙型肝炎病毒X基因对正常肝细胞HL7702凋亡影响的初步探讨
目的 研究乙型肝炎病毒X基因(HBX基因)对HL7702肝细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响.方法 用脂质体转染法将HBx真核表达载体pcDNA3.1(+)-X瞬时转入HL7702细胞,以转染空质粒pcDNA3.1(+)的细胞及未转染的HL7702细胞为对照.转染后72 h收集细胞标本,作以下处理:RT-PCR法检测HBX mRNA的表达,免疫荧光鉴定HBx蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;以β-actin为内参,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA的表达量变化.结果 转染72h后,转染pcDNA3.1(+)-X真核表达载体的HL7702细胞经RT-PCR扩增出HBX片段,免疫荧光结果 显示细胞内出现HBx蛋白的较强荧光;而转染空质粒组及未转染对照组经RT-PCR法及免疫荧光检测均显示无HBx表达.通过流式细胞术和半定量RT-PCR法检测细胞凋亡情况,结果 显示:转染HBX的细胞凋亡率(3.38%±0.67%)相对于转染空质粒组(1.25%±0.30%)及未转染质粒组(1.40%±0.37%)凋亡率增高, 差异均有显著性意义(P<0.05);转染HBx的细胞Bax mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显增高,差异均有显著性意义(P<0.05),Bcl-2 mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显降低,差异均有显著性意义(P<0.05).转染空质粒组和未转染质粒组之间,对细胞凋亡率、Bax mRNA、Bcl-2 mRNA进行比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论成功将HBX转染入HL7702细胞,并在细胞中表达;转染后72 h HBx可上调Bax表达,而下调Bcl-2表达,表明HBx能促进HL7702细胞凋亡.
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逍遥散保护受损肝细胞和抗肝纤维化的作用机理研究
目的 探讨逍遥散保护受损肝细胞和抗肝纤维化的作用机制.方法 观察不同浓度的逍遥散对CCl4诱导的肝细胞(HL7702)损伤模型及HSC-LX2细胞OD值,ALT,AST,SOD,MDA,LDH,Hyp和TIMP-1的影响.结果 0.008～0.200mg·ml-1逍遥散治疗组的OD值,SOD活力,ALT,AST,LDH,MDA含量,与模型对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);0.200,0.040mg·ml-1逍遥散组的OD值、Hyp、TIMP-1含量与空白对照组相比,差异具有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).结论 逍遥散通过提高SOD活性,降低ALT,AST,LDH,MDA含量保护受损的肝细胞,通过抑制肝星形细胞增殖,降低上清液中Hyp和TIMP-1的含量起到抗肝纤维化的作用.
