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色素性青光眼误诊分析
色素播散综合征(pigment dispersion syndromePDS)是以虹膜色素上皮受损,色素颗粒播散并沉着于眼前段为特征的一种常染色体显性遗传性疾病[1].PDS伴眼压升高为色素性青光眼(pigmentaryglaucoma PG).该病东方人罕见,易于高眼压症、开角型青光眼等疾病相混淆.
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虹膜色素上皮自体移植的现状及展望
随着对虹膜色素上皮(iris pigmant epithelium,IPE)细胞形态及功能研究的深入,IPE细胞有望取代视网膜色素上皮(retinal pigment epithelinm,RPE)细胞用于自体移植,从而避免了异体RPE移植的免疫排斥反应和自体RPE取材困难的问题.本文就IPE细胞生理功能和IPE细胞移植的动物试验和临床研究及进展进行了综述.
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成人虹膜色素上皮细胞的体外培养与超微结构观察
目的建立成人虹膜色素上皮(iris pigment epithelium,IPE)细胞体外分离培养方法.方法利用酶辅助显微分离-酶消化法分离成人IPE细胞后体外培养,应用免疫学方法鉴定,电镜观察超微结构.结果体外培养出成人IPE细胞,其形态呈多角形或不规则圆形,色素含量随传代次数增加而减少,角蛋白抗体免疫学染色阳性,电镜显示其具有正常的细胞器结构以及色素颗粒.结论酶辅助显微分离-酶消化法是IPE细胞分离与培养的理想方法.
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兔眼虹膜色素上皮细胞体外生物学特性研究
目的观察体外培养兔眼虹膜色素上皮(iris pigment epithelium,IPE)细胞的生物学特性,为IPE移植治疗老年性黄斑变性等疾病打下基础.方法应用扫描电镜、透射电镜对所培养IPE细胞的超微结构进行观察,并通过细胞的贴壁率、伸展率、倍增时间、总分裂次数的测定以及生长曲线的绘制对其在体外生长的生物学特性进行研究.结果体外培养的IPE细胞呈多角形,细胞内有色素颗粒和丰富的细胞器,细胞表面有长短粗细不等的微绒毛,生长成为具有尖-基底极性的细胞单层.IPE细胞伸展率为81.5%±3.7%;原代IPE细胞的贴壁率为32.18%±3.18%;传代培养的IPE细胞的贴壁率为86.20%±2.84%;细胞倍增时间为2～7 d,平均为(3.46±2.10)d;细胞总分裂次数为6～10代.结论体外培养IPE细胞与体内生长IPE细胞有着相似的生物学特性,通过对IPE细胞体外生物学特性的研究,为进一步探索其功能和自体移植提供了必要的实验基础.
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酶-机械分离-酶消化法分离培养兔眼虹膜色素上皮细胞
目的建立兔眼虹膜色素上皮细胞体外培养体系.方法采用酶-机械分离-酶消化法分离兔眼IPE细胞,台盼蓝染色法测定细胞活力,在体外对其进行原代及传代培养扩增,倒置相差显微镜观察IPE细胞的生长情况.取第2次传代的IPE细胞行AE1/AE3及S-100抗体细胞免疫组化染色对其进行鉴定.结果酶-机械分离-酶消化法分离得到IPE细胞的活力为70%～85%.原代细胞16～48h贴壁,72h后开始生长,细胞大多呈多角形或方形,少数为梭形,12～16d生长融合为单层细胞.第1次传代的IPE细胞6～12h贴壁,5～7d生长融合为细胞单层.IPE细胞在体外培养可传5～6代.免疫组化染色显示,几乎所有细胞胞浆呈现棕黄色阳性反应,对照组胞浆不染色.结论酶-机械分离-酶消化法分离培养兔眼IPE细胞易于操作,联合应用细胞角蛋白、S-100蛋白单克隆抗体的免疫组化技术可用来鉴定IPE细胞.
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兔眼虹膜色素上皮细胞自体视网膜下移植的研究
目的 探讨兔眼虹膜色素上皮(IPE)细胞的自体移植技术并进行术后移植区的细胞形态学观察.方法 通过虹膜全切法获取10只新西兰白兔的虹膜,采用酶-机械分离-酶消化的方法分离IPE细胞,用5溴脱氧尿嘧啶(5-Brdu)标记原代或一代的细胞.将标记过的IPE细胞悬液通过内路法分别植入对侧眼的视网膜下腔.术后2、4、6周摘除眼球对移植区进行光镜、电镜检查.结果 经免疫学鉴定纯化培养了兔眼IPE细胞.术后光镜显示移植的IPE细胞成单层贴附在原始的视网膜色素上皮(RPE)细胞上.电镜结果证实移植的IPE细胞尖端微绒毛与光感受器外节连接,邻近的光感受器细胞显示正常结构.结论 采用内路法可成功地将细胞悬液植入家兔视网膜下腔.6周内移植的自体IPE细胞在视网膜下腔存活,与原先的RPE细胞生长状态类似,邻近的光感受器细胞无形态改变.
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兔虹膜和视网膜色素上皮细胞的体外培养比较
目的观察比较有色素兔虹膜色素上皮(IPE)及视网膜色素上皮(RPE)细胞的体外生长状况.方法采用酶消化法及酶辅助机械分离法分别分离IPE和RPE细胞.观察培养的两种细胞的生长状况,并对其进行免疫组化鉴定.结果原代IPE及RPE细胞大多呈圆形或六边形,细胞内充满了黑色素颗粒.随着传代的增加,呈梭形或纤维细胞样生长的细胞增多,细胞中的色素颗粒也逐渐减少.细胞角蛋白免疫组化染色显示IPE及RPE细胞绝大多数呈棕黄色阳性反应.Desmin免疫组化染色显示IPE细胞中阳性细胞约占5%.结论分离培养的IPE和RPE细胞纯度很高,IPE细胞中绝大多数为后层IPE细胞.IPE和RPE细胞的形态及体外生长特点类似.
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虹膜色素上皮移植
自体虹膜色素上皮容易获得,能够吞噬光感受器外节盘膜,使得用它替代视网膜色素上皮细胞移植到视网膜下腔以治疗视网膜色素上皮变性疾病成为可能.对IPE和视网膜色素上皮(RPE)细胞的功能进行了比较,并对IPE细胞的培养方法,用IPE细胞移植治疗老年性黄斑变性和视网膜色素变性等技术进行了综述.
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腺相关病毒介导bFGF基因对虹膜色素上皮细胞的转染及表达
目的:评价重组腺相关病毒(rAAV)载体介导碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因转染体外培养的虹膜色素上皮细胞(IPE)后,bFGF基因在细胞内转录和翻译水平的表达情况.方法:取IPE细胞,转染含有分泌型bFGF全长cDNA和巨细胞病毒启动子的rAAV-bFGF,以未转染和同样条件下转染rAAV-GFP的细胞作对照.1周后,RT-PCR检测细胞中bFGF mRNA的表达. ELISA法检测细胞中bFGF蛋白的表达.结果:转染rAAV-bFGF的IPE细胞有bFGF mRNA的表达,转染rAAV-GFP和未转染细胞无bFGF mRNA的表达.以105个细胞计算,转染rAAV-bFGF的IPE细胞bFGF蛋白含量为(1.322±0.663)μg/L,高于未转染组的(0.213±0.036)μg/L和转染rAAV-GFP组的(0.243±0.050)μg/L,差异有统计学意义(F=18.294,P=0.000).结论:IPE细胞能被rAAV-bFGF转染,转染细胞能够在转录和翻译水平表达bFGF基因.
关键词： 腺相关病毒 碱性成纤维细胞生长因子 基因转染 虹膜色素上皮 -
自体虹膜色素上皮细胞移植治疗视网膜色素上皮细胞变性研究
目的:研究自体虹膜色素上皮细胞(iris pigment epithelium,IPE)移植治疗视网膜色素上皮细胞变性的效果.方法:采用酶-机械分离-酶消化法获取高纯度、高活力的IPE细胞用于移植,采用外路法将IPE细胞悬液移植入视网膜下腔.结果:IPE移植术后患者眼底移植区色素沉着减少,未见渗出,出血,视网膜平,视力人院时的0.15,术后2wk提高至0.2.多焦ERG显示移植区P1波平均反应密度上升.结论:自体虹膜色素上皮细胞移植有望成为视网膜色素上皮细胞变性疾病治疗的一新方法.
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兔眼虹膜色素上皮细胞的培养与鉴定
目的:体外培养和观察兔眼虹膜色素上皮细胞(IPEC),为临床和实验研究IPE细胞提供基础.方法:采用酶消化加酶辅助机械分离法分离IPE细胞,观察培养细胞的生长情况,并采用免疫荧光法对其进行鉴定.结果:原代培养的IPE细胞多数呈圆形或六边形,细胞内充满黑色颗粒.传代培养的IPE细胞呈梭形或纤维细胞样生长,细胞中的色素颗粒也逐渐减少.免疫荧光法对培养细胞进行cytokeratin染色显示IPE细胞成阳性反应,阳性率达100%.结论:采用酶消化加酶辅助机械分离法可成功地分离培养出IPE细胞.
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色素性青光眼合并睫状体脱离1例
0引言色素播散综合征(pigment dispersion syndrome, PDS)[1]是以虹膜色素上皮受损,色素颗粒播散并沉着于眼前段为特征的一种疾病.当PDS伴有眼压升高才称为色素性青光眼(pigment glaucoma, PG)[2].PG合并睫状体脱离的临床报告较为罕见,现我院报告1例.
