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粒细胞刺激因子对白血病细胞趋化因子受体4表达及趋化能力和骨髓微环境的影响
背景:骨髓微环境可通过细胞黏附分子介导白血病细胞耐药和免疫逃逸.这些黏附分子可作为新的作用靶点,通过降低其表达水平和功能,有望打破白血病耐药机制.目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony stimulating factor,rhG-CSF)对急性白血病WEHI-3细胞趋化因子受体4表达水平和趋化性的影响,以及在小鼠体内对骨髓基质细胞衍生因子1和外周血Treg细胞的作用.方法:①将急性白血病细胞株WEHI-3与rhG-CSF共同孵育6,12,18,24h后,用流式细胞术检测趋化因子受体4表达水平,微孔细胞转移实验检测其迁移能力;②健康Balb/C小鼠给予rhG-CSF皮下注射,ELISA法检测骨髓及外周血中基质细胞衍生因子1水平,流式细胞术检测脾脏及外周血Treg细胞比例.结果与结论:①rhG-CSF作用后WEHI-3细胞表面趋化因子受体4的表达水平明显下降(P＜0.05),细胞对基质细胞衍生因子1的趋化性显著降低(P＜0.05);②健康小鼠应用rhG-CSF处理后,骨髓中基质细胞衍生因子1水平较生理盐水组明显降低(P＜0.05),外周血及骨髓Treg细胞比例显著升高(P＜0.05);③结果表明,rhG-CSF可以下调白血病细胞表面趋化因子受体4的表达,降低骨髓中基质细胞衍生因子1水平,并可动员Treg细胞进入外周血,从而打破骨髓微环境介导的免疫逃逸和耐药,改善白血病的免疫治疗效果.
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原代人脐带间充质干细胞培养方法的研究
背景：如何获得大量稳定活力好的细胞是人脐带间充质干细胞培养的难点。
目的：通过组织块法、酶消化法和酶解组织块法3种细胞培养方法比较，筛选出佳的人脐带间充质干细胞的培养方式。
方法：分离新鲜脐带10根，分别采用组织块法、酶消化法、酶解组织块法3种方式培养人脐带间充质干细胞，比较3种方式原代人脐带间充质干细胞爬出所需时间、细胞培养成功率、绘制细胞增殖曲线，利用流式细胞仪检测细胞表面标志，并进行多项分化能力检测。
结果与结论：酶解组织块培养法原代人脐带间充质干细胞爬出所需时间与酶消化法无显著差异，但明显短于组织块法(P <0.01)，原代人脐带间充质干细胞培养成功率显著高于其他两组，人脐带间充质干细胞增殖情况3组无显著性差异，酶解组织块培养法培养的第3代人脐带间充质干细胞其细胞表面标志及多项分化能力符合间充质干细胞的特性。酶解组织块培养法能缩短原代人脐带间充质干细胞爬出时间，显著提高原代人脐带间充质干细胞的成功率。 -
不同体积分数富血小板血浆对血管内皮细胞增殖和迁移的影响
背景:富血小板血浆富含多种促进血管形成的重要因子,不同体积分数的富血小板血浆均能促进血管内皮细胞增殖、分化及迁移,但是何种体积分数为显著,目前还没有形成统一的认识.目的:观察不同体积分数富血小板血浆对血管内皮细胞增殖活性及迁移能力的影响.方法:采用酶消化法分离SD大鼠心脏微血管内皮细胞,分别用含体积分数为10％,20％,50％富血小板血浆的DMEM培养液进行培养.倒置显微镜下观察细胞形态,MTT比色法检测血管内皮细胞增殖情况,细胞划痕实验观察血管内皮细胞的迁移能力,终筛选出佳富血小板血浆体积分数.结果与结论:①加入富血小板血浆干预后内皮细胞形态规则,生长旺盛,随培养时间延长大部分细胞变成多角形,细胞较大;②不同体积分数的富血小板血浆均对血管内皮细胞增殖具有促进作用,其中以培养72 h体积分数为20％富血小板血浆组对细胞的增殖促进作用为明显;③体积分数为20％,50％富血小板血浆明显促进细胞迁移,其中体积分数为20％富血小板血浆组细胞相对迁移距离高;④结果表明,富血小板血浆可促进体外培养的血管内皮细胞增殖和迁移,且体积分数为20％富血小板血浆的作用效果佳.
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构建HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物及对乳腺癌细胞增殖的影响
背景：凋亡素(Apoptin)能诱导50种以上不同类型的肿瘤细胞凋亡，有望成为一种极具应用前景的抗肿瘤制剂。如何安全、有效地将其应用于临床，是一个亟待解决的具现实意义的问题。
目的：拟制备人血清白蛋白(HSA)与Apoptin基因的复合物，通过体内外实验验证其抗瘤效果，为Apoptin尽早应用于基因治疗寻找一个简单有效的转移方式。
方法：①构建含Apoptin基因的真核表达载体pcDNA-Apoptin。以水溶性碳二亚胺(EDC)为交联剂，将聚醚酰亚胺(PEI)与人血清白蛋白(HSA)连接，合成HSA-PEI复合物，然后经电荷中和效应将HSA-PEI复合物与pcDNA-Apoptin重组体及pcDNA空载体分别连接，形成相应HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物；②将HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物转染乳腺癌MCF-7细胞，Western blot检测Apoptin基因在细胞中的表达，MTT法和流式细胞术检测转染后细胞增殖情况；③建立裸鼠乳腺癌模型，使用尾静脉注射法，分别将0.5 mL HSA-PEI-pcDNA-Apoptin、HSA-PEI-pcDNA及生理盐水注射入裸鼠体内，4周后测量肿瘤体积。
结果与结论：①成功构建并鉴定了HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物，体外成功转染乳腺癌MCF-7细胞；②HSA-PEI-pcDNA-Apoptin转染MCF-7细胞24 h有Apoptin蛋白的表达，而转染HSA-PEI-pcDNA细胞及空白对照组细胞未见Apoptin蛋白的表达；③体外细胞增殖实验提示HSA-PEI-pcDNA-Apoptin组吸光度值明显低于 HSA-PEI-pcDNA 组及空白对照组(P <0.05)；④裸鼠乳腺癌模型HSA-PEI-pcDNA-Apoptin组肿瘤体积小于HSA-PEI-pcDNA组及空白对照组(P<0.05)；⑤结果表明， HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物有明显的抑制肿瘤作用。
