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负压条件下骨髓间充质干细胞向表皮细胞的诱导分化
背景:负压作为一种物理因素影响间充质干细胞的分化,其可以促进间充质干细胞向成骨细胞、内皮细胞分化.如果能发现负压对于间充质干细胞向表皮细胞分化的作用,对未来临床上负压联合干细胞修复创伤具有重要意义.目的:探讨负压作用条件对兔骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化的影响.方法:分离培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞,取第3代骨髓间充质干细胞在负压下(-16.625 kPa,2次/d, 4 h/次)进行成表皮诱导分化,设置0 kPa组为对照组,绘制细胞生长曲线,实时荧光定量PCR检测负压条件下诱导2周后CK-5、CK-10 mRNA的表达.结果与结论:与0 kPa组比较,16.625 kPa组细胞生长受抑制,细胞CK-5、CK-10 mRNA表达水平增高,差异均有显著性意义(P < 0.05).说明负压能抑制细胞增殖,促进兔骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化.
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RUNX2基因对于ADSCs向表皮分化的影响研究
目的 诱导人脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)在体外向表皮细胞分化并探讨 RUNX2基因对 ADSCs 表皮分化的影响.方法 利用胶原酶消化法分离培养 ADSCs,体外诱导 ADSCs向表皮细胞分化.慢病毒载体介导RUNX2基因转染ADSCs并通过 Western blot、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫荧光验证RUNX2、相关表皮细胞标记物CK18、ZO-1的蛋白和 mRNA的表达.结果 ADSCs向表皮诱导 14天后, RUNX2、CK18、ZO-1的 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05);过表达RUNX2慢病毒转染后的 ADSCs以上指标均显著高于对照组和阴性对照组(P<0.05).结论 RUNX2过表达可在一定程度上促进 ADSCs向表皮细胞诱导分化.
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慢病毒介导E-cadherin过表达对人脂肪干细胞成表皮分化的影响
目的 探讨E-cadherin对人脂肪干细胞(hADSCs)成表皮分化的影响.方法 利用胶原酶消化法从成人脂肪组织中分离培养hADSCs.携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒载体(Lv-EGFP)介导E-cadherin基因以10、25、50和100的感染复数(MOI)作用72 h转染hADSCs,荧光显微镜下观察荧光强度并统计转染效率.Lv-EGFP-E-cadherin过表达组慢病毒和Lv-EGFP对照组慢病毒分别转染hADSCs,未转染的hADSCs为空白组;4天后RT-PCR检测E-cadheirn mRNA的表达.将各组hADSCs经成表皮诱导14天后,RTPCR检测表皮细胞标志物CK18、ZO-1 mRNA的表达情况.结果 3代以后hADSCs呈均一长梭形,增殖活跃.MOI=10、25、50、100时,EGFP阳性率分别为51.9％±2.68％、95.1％±3.82％、95.6％±2.56％、96.9％±2.25％,选择MOI=25为佳转染滴度进行后续实验.与对照组及空白组相比,转染Lv-EGFP-E-cadherin过表达慢病毒可显著增强hADSCs中E-cadherin mRNA的表达(P＜0.05),E-cadherin过表达后可显著增高细胞中CK18、ZO-1 mRNA的表达(P＜0.05),促进成表皮分化.结论 E-cadherin过表达可在一定程度上促进hADSCs向表皮细胞诱导分化.
关键词： E-cadherin 脂肪干细胞 表皮分化 慢病毒 创面修复 -
T细胞、角蛋白10、Ki-67在进展期银屑病皮损和皮损边缘皮肤的表达和意义
目的:探讨T细胞、增殖标记(Ki-67)、角蛋白10阳性细胞在进展期银屑病皮损和皮损边缘皮肤的水平.方法:采用免疫组化法检测19例寻常型银屑病进展期皮损中央、皮损边缘、皮损边缘正常皮肤和远离皮损5 cm正常皮肤的T细胞亚群、Ki-67和K10+的表达.结果:皮损边缘CD4+、CD25+T细胞数目明显增多,表皮增殖标记(Ki-67)明显增加,而10+呈低表达.结论:CD4+、CD25+T细胞在银屑病发病的早期起着一定作用,Ki-67表达水平反映了角质形成细胞的增殖状态,K10+在银屑病皮损的低表达意味着角化过程普遍受损.
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表面酶在体内平衡中的作用及其与皮肤病的关系
皮肤的主要功能是保护身体免受环境中有害化学物质或微生物侵害的一种屏障.表皮分化不断更新屏障的成分,以保证皮肤的佳功能.这些变化都是由细胞内外的酶决定的,而这些酶的活性是由体内平衡过程控制的.这种结构上和机理上的复杂性可从不同的皮肤病理学机理上看到,如一些先天性皮肤病其特征是在脱屑过程(由于滞瘤而导致角化过度)或在形成角质层的过程中(由于增殖而角化过度)出现错误,这与角化过程中相关的酶缺乏或改变有关[1].
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表皮角质分化过程中的信号转导
表皮是人体的第一道防护屏障,对维持机体内环境的稳定起到了巨大的作用.表皮是新陈代谢频率较快的组织,正常机体中表皮的增殖、分化和凋亡处于一种动态的平衡中,一旦这种平衡失调,将会导致严重的皮肤病,因此,机体内应有一套精密的调控系统来调控这一过程.Notch、TGF-β和钙离子等信号通路可能参与了表皮的分化.
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复合壳多糖人工皮肤的初步实验研究
目的探讨复合壳多糖人工皮肤移植家兔后表皮层角蛋白的表达以了解移植后皮肤表皮的分化情况.方法分别将复合壳多糖人工皮肤移植前、移植后1个月、移植后2个月、正常人皮肤、正常兔皮肤石蜡块切片,用抗广谱角蛋白多抗、抗角蛋白K5和K10单抗进行免疫组化染色,观察表皮层角蛋白的表达和表皮分化情况.结果复合壳多糖人工皮肤移植后1个月及2个月表皮层均有较强的角蛋白表达,与正常皮肤相似;基底层以上细胞有角蛋白K10表达,且越接近表皮表面表达越强,与正常人皮肤相似,基底层细胞有角蛋白K5表达,但明显弱于正常人皮肤.结论复合壳多糖人工皮肤移植家兔后表皮层均有角蛋白表达,有增生性细胞和分化细胞,表皮分化良好、层次清楚,与正常皮肤相近.
