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吉西他滨纳米磁靶向药囊对肺鳞癌移植瘤抑制作用及癌基因Ras表达的影响
目的 研究吉西他滨纳米磁靶向药囊对肺鳞癌A2细胞株体内移植瘤的抑制作用及对癌基因Ras mRNA及Ras蛋白表达的影响.方法 选择SPF级雄性裸鼠60只.取处于对数生长期的的肺鳞癌细胞株A2细胞,用含有EDTA的胰酶消化后,悬液接种于在裸鼠右股外侧制作鳞癌移植瘤模型.20 d后选取肿瘤体积约为72.5 mm3的裸鼠作为实验动物模型,并分为5组:(1) NiTi合金支气管支架+吉西他滨纳米磁靶向药囊组;(2) NiTi合金支气管支架+吉西他滨组;(3)吉西他滨纳米磁靶向药囊组;(4)吉西他滨组;(5)未干预组.NiTi合金支气管支架于肿瘤中手术植入,纳米磁靶向药囊或化疗药物通过尾静脉注入,其中吉西他滨纳米磁靶向药囊为本研究自行制备,吉西他滨有效剂量均按45 mg/kg给予.未干预组尾静脉注射同量的生理盐水处理.均连续给药10 d.比较各组处理后的肿瘤生长情况.利用Western Blot和RT-PCR法分别检测治疗后癌组织中Ras蛋白及Ras mRNA的相对表达水平.结果 与未干预组相比,NiTi合金支气管支架+吉西他滨纳米磁靶向药囊组、NiTi支架+吉西他滨组、吉西他滨纳米磁靶向药囊组、吉西他滨组的瘤重和体积均明显减少(P＜0.05,P＜0.01),其抑瘤率分别为59.0％、38.0％、33.0％、28.0％.NiTi合金支气管支架+纳米磁靶向药囊组Ras蛋白、Ras mRNA相对表达水平低(P均＜0.01),与未干预组比较,NiTi合金支气管支架+化疗药物组、纳米磁靶向药囊组、化疗药物组Ras蛋白、Has mRNA相对表达水平均有所下降(P均＜0.05),但3组之间差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 纳米磁靶向药囊合并NiTi合金支气管支架可以显著抑制肺鳞癌A2细胞移植瘤的生长,下调癌基因Ras mRNA和Ras蛋白的表达,诱导肿瘤细胞凋亡.
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Ras基因在肝癌中表达的意义
目的:探讨ras基因家族在肝癌中表达的意义.方法:应用原位杂交与免疫组织化学方法检测肝癌组织与癌旁肝病组织中ras基因蛋白p21及ras家族基因N-ras,H-ras和Ki-ras.结果:肝癌与癌旁肝病组织中ras基因阳性率分别为90%(36/40)和82.3%(28/34),相对正常肝组织中ras基因阳性率为33.3%(2/6),癌与癌旁肝病组织中ras基因阳性率无显著差异,而肝癌、癌旁肝病组织与相对正常肝组织中ras基因阳性率有显著差异(P<0.01).且原位杂交方法与免疫组化方法检测ras基因表达无显著差异,原位杂交检测的ras基因家族成员之间亦无显著差异,但ras表达强度与癌分化程度有关,呈抛物线型特点.结论:ras基因的表达是肝癌发生的早期事件,是肝癌形态学发生中的分子改变,癌变过程癌细胞合成增加,但在癌分化降低时,活跃增殖的癌细胞中ras合成反而受抑,免疫组化方法较原位杂交方法检测ras基因更经济,简便.
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Ras基因及其信号转导通路与皮肤肿瘤关系
Ras基因是人类肿瘤中一种常见的癌基因,约有30%的恶性肿瘤存在Ras基因的点突变.皮肤肿瘤是一种常见的肿瘤,Ras基因及其信号转导通路的异常与皮肤肿瘤的发生、发展密切相关.文中就Ras基因及其信号转导通路与皮肤肿瘤关系作一综述.
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反义ras基因增强足叶乙甙对白血病K562细胞的诱导凋亡作用
目的研究ras p21蛋白在bcr-abl p210蛋白抗凋亡信号传导通路中的作用.方法应用逆转录病毒载体pLxSN将反义N-ras1 cDNA转导到K562细胞系中后,通过足叶乙甙对细胞进行诱导凋亡.结果转导反义N-ras1 cDNA的K562细胞内N-ras p21表达下降.反义N-ras转导细胞较对照细胞K562易发生凋亡,对药物的敏感性显著增高.结论ras p21蛋白是bcr-abl p10蛋白介导抗凋亡信号的重要的下游蛋白,阻断该蛋白的功能有可能成为治疗人类慢性髓性白血病的1个选择点.
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ras 基因在肿瘤发生、发展及诊断中的作用研究进展
ras基因家族包含3种功能性基因，即H-ras、N-ras、K-ras，3种基因内部的核甘酸序列相差较大，但均含有1个5′非编码外显子和4个编码外显子，编码的产物相对分子质量为21000的G蛋白单体，称为p21蛋白（ ras蛋白）。 ras蛋白主要调节细胞的分化增殖，被称为细胞信号网络传递中的“分子开关”。 ras基因是原癌基因，其被激活后就成为了具有致癌活性的癌基因。其激活方式主要有3种，即基因的点突变、基因大量表达以及基因的插入及转位。其中常见的就是点突变，约30％的人类恶性肿瘤存在ras基因的点突变。常见是K-ras 的点突变，其次是N-ras、H-ras；常见的突变位点是12、13、61密码子，其中又以第12位密码子突变常见。在不同类型肿瘤中存在不同的ras 基因突变。胰腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、胆管癌和肺癌中普遍存在K-ras基因突变，黑色素瘤和髓系恶性肿瘤常为N-ras基因突变所致，而肝癌、甲状腺癌和膀胱癌常见H-ras基因突变。现将ras基因在肿瘤发生、发展及诊断中的作用研究进展综述如下。
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P53、P21和P185在胃癌中的表达及临床意义
目的:研究胃癌中P53、P21、P185表达与胃癌生物学行为的关系.方法:应用免疫组化Sp法检测62例胃癌中抑癌基因P53、癌基因ras和c-erbB-2的蛋白表达.结果:胃癌中P53、P21、P185的表达率分别为46.8%、45.2%、41.9%;低分化胃癌P53表达率高于高、中分化胃癌(P＜0.05);肌层或浆膜层侵犯的P185表达率高于局限于粘膜层和粘膜下层(P＜0.05);淋巴结转移阳性组P185表达率高于淋巴结转移阴性组(P＜0.05).结论:P53、ras、c-erbB-2基因协同作用参与了胃粘膜的癌变过程,且与胃癌生物学行为有关.
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胰腺癌细胞Flt-1受体表达与p53、ras基因突变的关系
目的探讨胰腺癌细胞Flt-1受体表达与p53、ras基因突变之间的关系,了解Flt-1受体表达与p53、ras基因突变在胰腺肿瘤血管形成中的作用.方法采用免疫组织化学EnVisionTM方法检测40例原发性胰腺癌组织Flt-1受体和p53、ras基因的表达;采用χ2检验分析Flt-1受体表达与p53、ras突变基因的相关性.结果 Flt-1受体和p53、ras基因的阳性表达率分别为77.5%(31/40)和50%(20/40)、60%(24/40).经连续切片对比分析表明,在Flt-1受体表达较高的区域,p53、ras基因的表达亦较强,Flt-1受体表达与p53基因突变呈显著相关性(χ2=4.35, P<0.05),但与ras基因表达之间无显著相关性(χ2=2.12, P>0.05).结论胰腺癌细胞Flt-1受体表达与p53基因突变之间有显著相关性,与ras基因突变之间无显著相关性,提示野生型p53基因发生突变可能会失去抑制Flt-1受体表达的功能,从而导致胰腺肿瘤血管的新生,促进肿瘤细胞生长;ras突变基因可能通过其他的途径参与胰腺肿瘤新生血管的形成.
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nm23-H1及ras基因在人乳腺癌组织中的表达及其与淋巴转移的关系
目的探讨乳腺癌组织中nm23-H1及ras基因的表达及其与淋巴结转移的关系.方法应用免疫组化方法检测76例乳腺组织中nm23-H1及ras基因的表达情况,随访患者5年生存率.结果 nm23-H1表达与乳腺癌组织分化及淋巴结转移负相关(P<0.025,P<0.05),nm23-H1及rasp21表达负相关(P<0.05),nm23-H1阳性者较rasp21阳性者五年生存率高(P<0.01).结论 nm23-H1及rasp21是评估乳腺肿瘤患者预后的良好指标,二者联合检测更有价值.
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胃癌组织ras基因突变及其与幽门螺杆菌感染的关系
目的初步探讨胃癌组织中ras基因突变与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)感染的关系.方法 43例胃癌组织新鲜标本及相应血清标本纳入研究.用PCR-RFLP法测定ras基因12密码子的突变;用血清学方法检测Hp的感染状况.结果 43例胃癌中有28例存在ras基因12密码子的突变,突变率为65.12%;43例胃癌中,Hp阳性30例,阳性率为69.77%,其中CagA阳性24例,阳性率为80%;30例Hp阳性的胃癌中,有19例发生ras基因12密码子的突变,发生率为63.33%,13例Hp阴性的胃癌中,有9例发生ras基因12密码的突变,发生率为69.23%,二者比较无明显差异(P＞0.05).结论 ras基因12密码子的突变可能与胃癌的发生有关,胃癌中ras基因12密码子的突变与Hp及CagA阳性的Hp感染无明显相关性,Hp感染可能不是其改变的唯一或必须因素.
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化疗栓塞对肝细胞癌癌基因ras/p21表达的影响
目的:研究原癌基因ras/p21在肝细胞癌(HCC)中表达的意义以及不同化疗栓塞方法对其表达的影响.方法:7种不同组织学类型的HCC共98例,单纯手术治疗57例,4种介入治疗后二期切除41例.采用SABC免疫组化方法,检测各样本中ras/p21的表达,并与临床转移情况对照.结果:ras/p21阳性和阴性者转移率分别为75.0%、37.9%(χ2=4.67,P＜0.05),介入治疗组及其A、B、C、D各组和单纯手术组p21阳性率分别为29.3%、57.1%、25.0%、20.0%、27.3%、61.4%(介入组分别与单纯手术组相比,χ2值依次为9.87、0.04、3.79、8.17、4.36,P值依次为＜0.01、＞0.75、＞0.05、＜0.01、＜0.05).化疗栓塞使HCC各组织学类型及各病理分级ras/p21表达不同程度下降.介入组与单纯手术组转移率分别为48.8%、56.1%(χ2=0.52,P＞0.25).结论:ras/p21高表达可促进HCC转移,就ras/p21而言,化疗栓塞可抑制HCC转移潜能,且碘油、无水乙醇、明胶海绵多材料联合化疗栓塞优于单一材料栓塞和单纯化疗.
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肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析
目的:研究肺鳞癌、腺癌与Ki-ras基因外显子1,2及p53基因外显子7,8突变谱并观察肺鳞癌、腺癌预后同Ki-ras和p53基因突变的关系.方法:用PCR和测序方法分析33例肺鳞癌和27例肺腺癌Ki-ras基因外显子1,2和p53基因外显子7,8错义突变.并追踪观察突变者和非突变者的二年存活率.结果:肺鳞癌中发现5例(15.16%)Ki-ras基因突变和12例(36.37%)p53基因突变;肺腺癌中发现2例(7.41%)Ki-ras基因突变和7例(25.93%)p53基因突变,两型肺癌间Ki-ras和p53基因突变阳性率差异均无统计学意义(P＞0.05);肺鳞癌、腺癌中p53基因突变总阳性率为31.67%,Ki-ras基因突变总阳性率仅11.67%,p53基因突变率高于Ki-ras基因突变率(P＜0.05).p53基因突变谱与一般报道相似.Ki-ras基因突变情况与一般报道有所不同,未发现一般文献报道较多的第12位等密码子突变,发现有第6位密码子纯合性突变和第31位和第79位密码子杂合性突变.预后追踪显示:无突变的病例2年生存率为40%,存在突变的病例2年生存率仅12%.结论:肺鳞癌、腺癌的Ki-ras和p53基因突变谱较广,肺鳞癌和腺癌的预后均与这两个基因突变有关.
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3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮对小鼠ras、wt-p53基因表达的影响
目的 研究3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮(3-chloro-4-dichloromethyl-5-hydroxy-2(5H)-furanone,MX)对小鼠多组织的ras与野生型p53基因(wt-p53)表达的影响,从基因水平探讨MX致癌的机制.方法 昆明种雄性成年小鼠,每天按21 mgMX/kg的剂量经腹腔注射染毒,连续6d,生理盐水作溶剂对照.末次染毒24h后处死.运用原位杂交技术检测MX对小鼠肝、肾和小肠组织的ras基因与wt-p53基因表达的影响.结果 MX染毒组小鼠的肝、肾和小肠的ras-mRNA表达水平(0.165±0.007,0.155±0.011,0.196±0.035)明显高于溶剂对照组(0.147±0.007,0.136±0.004,0.132±0.026),且差异有统计学意义(P＜0.05).wt-p53-mRNA表达水平在MX染毒组略为降低,但与溶剂对照组相比没有统计学意义.结论 MX可诱导小鼠肝、肾和小肠组织中ras基因转录活性增强,但未能诱导野生型p53基因的异常表达.
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突变型[12Asp]K-ras4B基因的致瘤作用及其机制的探讨
背景与目的:有资料提示 K-ras基因突变可能与子宫内膜癌的发生有关.本研究在发现子宫内膜腺癌 HEC-1A细胞有 K-ras基因第 12密码子突变的基础上,探讨 [12Asp]K-ras4B突变基因的致瘤性及其发生机制.方法:(1)用 RT-PCR方法扩增 [12Asp]K-ras4B基因全长 cDNA,将此 cDNA插入真核表达载体 pcDI,构建 pcDI-[12Asp]K-ras4B真核表达质粒 ;(2)观察真核表达质粒 pcDI-[12Asp]K-ras4B转染前后细胞形态学改变,用 MTT方法、 3H掺入实验、集落形成实验检测转染前后细胞体外生长的变化,以及用转基因肿瘤细胞裸鼠异种接种成瘤实验,了解 [12Asp]K-ras4B的致瘤作用.结果:(1)成功构建了真核表达质粒 pcDI-[12Asp]K-ras4B.(2)通过转染前后细胞形态学变化、体外增殖变化、软琼脂集落形成实验以及裸鼠皮下转染细胞接种实验,证明 [12Asp]K-ras4B基因具有致瘤作用.(3)将 pCMV-RasN17质粒转染到 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞,与未转染细胞比较,发现 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞增生受到明显抑制.(4)分别将 pCMV-RafS621A和 pCMV-RafCAAX质粒转染到 pcDI-[12Asp]K-ras4B NIH3T3细胞,与未转染的细胞比较,转染 pCMV-RafS621A质粒的 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞增殖受到抑制,与对照组比较差异显著(P< 0.05); 转染 pCMV-RafCAAX质粒的 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞增殖活性加强,与对照组比较差异显著(P< 0.05). 结论:(1)[12Asp]K-ras4B基因单独作用即可诱导 NIH3T3细胞瘤样转化 ;(2)[12Asp]K-ras4B基因诱导的 NIH3T3细胞瘤样转化是通过下游的 Raf信号通路.
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EGF对肝癌细胞及正常肝细胞内ras基因表达的影响
目的:揭示正常肝细胞和肝癌细胞对表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)不同的应答能力,以及EGF对两种不同细胞株内ras基因表达的影响.方法:运用Western免疫印迹技术对正常肝细胞株L-02和肝癌细胞株Hep-G2中p21ras的表达进行比较分析.结果:在两种细胞株L-02和Hep-G2中都检测到p21ras的表达.Hep-G2细胞的p21ras表达量在EGF刺激前明显高于L-02细胞,经EGF刺激2周后,p21ras的表达量持续攀升,表达曲线陡峭.而L-02在EGF刺激下上升得比较缓慢,到第4周以后基本维持恒定的表达量.结论:正常肝细胞和肝癌细胞内ras基因的表达都受EGF的影响,但二者对EGF的应答能力明显不同.肝癌细胞内ras基因的高表达可能与细胞内缺乏有效的反馈机制有关,而ras基因的表达持续升高可能是导致细胞增殖失控的一个重要原因.
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痰脱落细胞ras基因突变在肺癌诊断中的意义
目的 探讨痰脱落细胞中ras基因突变在肺癌诊断中的价值及危险度.方法 收集66例肺癌患者痰液,分离痰脱落细胞,并抽提脱落细胞DNA,用PCR-SSCP-AgNO3染色法快速分析ras基因点突变情况.结果 66例肺癌患者痰液中癌细胞检出率为66.7%(44/66),ras基因点突变检出率为71.2%(47/66),二者检出率差异无显著性(P＞0.0 5).肺癌细胞类型:腺癌24例、鳞癌18例和未分化癌24例,其K-ras基因点突变率分别为:66.7%、27.8%和50.0%,腺癌的突变率高(P ＜0.05);H-ras基因点突变率分别为:26.1%、21.1%和16.7%(P＞0.05);K-ras和H-ras基因累计突变阳性率为91.7%、50.0%和66.7%,也以腺癌的突变率为高(P＜0.05).结论 肺部疾病患者痰脱落细胞K-ras和H-ras基因突变检测阳性结果可能有助于肺癌的早期诊断.
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皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族12/13位密码子突变的检测
目的:探讨皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族(H-ras/N-ras/K-ras)12/13位密码子的突变情况.方法:从14例皮肤病理性瘢痕,14例瘢痕癌石蜡包埋组织中提取DNA,进行PCR扩增及测序,分析H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子突变情况.结果:28个样本均成功提取DNA,扩增出基因片段,经测序均未发现H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子的,点突变.结论:皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族的突变位点有待进一步探讨.
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乌头类生物碱对ras基因表达影响及其抗肿瘤分子机制研究
[目的]研究乌头类生物碱对细胞增殖周期和ras基因表达的影响,探讨乌头类中药抗肿瘤作用的分子机制. [方法]体外培养大鼠视网膜神经细胞,分别以0.5%的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱作用细胞5 min后,流式细胞仪检测.[结果]乌头碱、新乌头碱和次乌头碱作用下,细胞增殖活动被抑制,ras基因表达量显著下降.[结论]ras基因及Ras/Raf/MEK/MAPK信号级联通路可能是乌头类中药抗肿瘤作用的重要靶点.
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连黛片对大鼠溃疡性胃癌ras基因点突变的影响
用醋酸注射法造成大鼠胃溃疡模型，再以MNNG灌胃诱发胃癌，观察连黛片对胃癌形成及对ras基因点突变的影响，结果表明，连黛片可减少MNNG对ras的甲基化，抑制ras点突变及过表达，降低溃疡性胃癌的发生率。
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大肠癌K-ras和p53基因序列分析
目的研究大肠癌变与K-ras和p53基因突变的关系.方法采用PCR-DNA双链四色荧光单道测序方法对31例大肠癌组织、13例大肠息肉伴不典型增生、11例大肠癌术后并发的腹水标本进行K-ras基因外显子1、2和p53基因外显子5、6、7、8测序分析.结果 31例大肠癌组织中发现K-ras基因突变7例,p53基因突变11例,阳性率分别为22.58%和35.48%;13例大肠息肉伴不典型增生组织中发现p53基因突变2例;11例术后腹水标本中发现K-ras基因突变1例和p53基因突变2例,且突变与患者原包埋组织结果一致.但未发现这两个基因同时突变的病例.结论大肠组织癌变与这两个基因突变密切相关,K-ras和p53基因突变可能为大肠癌变的早期事件;DNA测序方法是研究癌基因突变的精确可靠的方法.
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甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中FoxM1的表达对Ras及CDK1的影响
目的 研究甲状腺乳头状癌中叉头框蛋白M1 (FoxM1)基因的表达以及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的重要基因Ras及CDK1的影响,以探讨FoxM1在甲状腺乳头状癌中是否通过MAPK通路发挥作用.方法 用hFoxM1-RNA干扰处理甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中FoxM1基因的表达,使用实时荧光定量PCR法检测处理后的TPC-1癌细胞和未经处理的TPC-1癌细胞中Ras和CDK1基因的表达水平变化,观察甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中FoxM1的表达对Ras和CDK1的影响.结果 与未经处理的甲状腺乳头状癌TPC-1细胞相比,使用hFoxM1-RNA干扰处理后的TPC-1细胞中FoxM1 mRNA表达明显降低(0.452 9比1.005 0,t=24.692 9,P＜0.01),Ras mRNA的表达相应升高(1.319 0比1.001 2,t=14.218 5,P＜0.01),而CDK1 mRNA的表达相应降低(0.767 5比1.008 1,t=10.763 4,P＜0.01).结论在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中FoxM1基因表达水平可对Ras和CDK1的表达产生影响,其在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中的作用机制可能与MAPK信号通路有关.
