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鞘磷脂及神经酰胺对人结肠癌细胞(HT-29)的影响
目的研究鞘磷脂及其代谢产物神经酰胺对人结肠癌细胞的影响.方法采用噻唑蓝(MTT)显色法、细胞核分裂指数和3H-TdR掺入试验方法,所设剂量分别为鞘磷脂5、10、20、40 μg/ml和神经酰胺6.25、12.5、25、50 μmol/L,分别以无水乙醇和二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照.结果鞘磷脂对HT-29细胞的生长无明显作用,神经酰胺对HT-29细胞的生长有明显抑制作用.在MTT试验中,不同浓度神经酰胺对HT-29细胞的7 d抑制率分别为39%、85%、98%和98%;在核分裂指数试验中,随着神经酰胺剂量的增高,其核分裂指数明显降低;在3H-TdR掺入试验中,可见随着神经酰胺剂量的增高,3H-TdR掺入到HT-29细胞中明显的减少,与阴性对照组相比,差异有显著性(P<0.05).结论鞘磷脂对HT-29细胞生长无明显作用,神经酰胺对HT-29细胞的生长增殖有明显抑制作用,这可能是鞘磷脂抑制结肠癌的机制之一.
关键词： 鞘磷脂 神经酰胺 人结肠癌HT-29细胞 -
神经酰胺诱导人结肠癌细胞凋亡的作用
目的探讨外源性神经酰胺诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的作用.方法采用噻唑兰(MTT)显色法、荧光显微镜、电镜观察以及通过免疫组化方法检测Fas、P53的表达情况.结果神经酰胺对HT-29细胞的生长有明显抑制作用,并可诱导HT-29细胞产生凋亡,并随着神经酰胺浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加;Fas蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现逐渐升高的趋势,p53蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现降低的趋势.结论神经酰胺能诱导HT-29细胞产生凋亡.
关键词： 神经酰胺 人结肠癌HT-29细胞 细胞凋亡 -
鞘氨醇对人结肠癌细胞的抑制作用
目的研究鞘氨醇对人结肠癌细胞的影响.方法采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)、细胞核分裂指数和3H-TdR掺入试验方法,所设剂量鞘氨醇分别为0,0.82,1.63,3.125,6.25,12.5μmol/L,以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照.结果鞘氨醇对HT-29细胞的生长有明显抑制作用.在MTT试验中,不同浓度鞘氨醇对HT-29细胞的7 d抑制率分别为18%,45%,72%,87%和89%;在核分裂指数试验中,随着鞘氨醇剂量的增高,其核分裂指数明显降低;在3H-TdR掺入试验中,可见随着鞘氨醇剂量的增高,3H-TdR掺入到HT-29细胞中明显的减少,与阴性对照组相比有显著性差异.结论鞘氨醇对HT-29细胞的生长增殖有明显抑制作用,这可能是鞘磷脂抑制结肠癌的机制之一.
关键词： 鞘氨醇 人结肠癌HT-29细胞 -
辽东楤木叶总皂苷对结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用及机制研究
目的 研究辽东楤木叶总皂苷(ETS)对HT-29细胞生长的抑制作用及作用机制.方法 采用MTT法检测ETS对HT-29细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测ETS对HT-29细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测ETS对HT-29细胞PLK1蛋白表达的影响.结果 ETS对结肠癌HT-29细胞增殖有明显抑制作用,IC50值为39.62 mg·L-1.在10～40 mg·L-1剂量作用下,可剂量依赖性诱导HT-29细胞凋亡.ETS主要将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而可剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖.ETS可明显抑制HT-29细胞PLK1蛋白的表达.结论 ETS体外可明显抑制HT-29细胞的生长,其抗肿瘤作用与细胞周期阻滞、细胞凋亡及抑制PLK1蛋白表达有关.
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半夏泻心汤通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路对结肠癌细胞增殖和转移的影响
目的:观察半夏泻心汤调控磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI-3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对人结肠癌HT-29细胞增殖和转移的作用机制.方法:将40只大鼠按随机数字表法分为4组,每组10只,分别是空白对照组、半夏泻心汤+5-氟尿嘧啶(5-florouracil,5-FU)组、5-FU组和半夏泻心汤组.采用MTT法检测各组大鼠用药后对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响;采用划痕实验检测各组大鼠用药后对HT-29细胞转移能力的影响;采用Western-blotting法检测各组用药对大鼠mTOR、PTEN蛋白表达水平的影响.结果:半夏泻心汤+5-FU组能够抑制HT-29细胞增殖,且呈剂量-时间依赖性,与其他3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);半夏泻心汤+ 5-FU组能够抑制HT-29细胞转移,且呈剂量依赖性,与其他3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);半夏泻心汤+ 5-FU组上调抑癌基因PTEN蛋白表达量,能够下调mTOR蛋白表达量,与其他3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:半夏泻心汤具有抑制人结肠癌HT-29细胞增殖和转移的作用,其机制可能与调控PI3 K/AKT/mTOR信号通路有关.
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复合螺旋藻多糖对人结肠癌HT-29细胞株体外抗肿瘤作用的研究
目的 研究复合螺旋藻多糖对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的抑制作用及其机制.方法 将螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶提取物(GBE)按一定比例复合,用不同浓度的复合制剂分别对细胞作用后,在显微镜下观察细胞形态学变化、用MTT法测其生长抑制率、PI及AnnexinV-FITC/PI染色后,流式细胞仪测细胞周期及凋亡率.结果 不同比例和浓度的复合螺旋藻多糖对人结肠癌HT-29细胞均有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,抑制作用高于单一成分组；细胞阻滞于S期,凋亡细胞增加.结论 复合螺旋藻多糖通过阻断细胞周期而抑制体外培养人结肠癌HT-29细胞的生长,并能够促进细胞凋亡,具有较好的抑肿瘤活性.
关键词： 螺旋藻多糖 人结肠癌HT-29细胞 生长抑制 细胞周期 细胞凋亡 -
吉祥草提取物对人结肠癌HT-29细胞体外抑制作用的研究
目的 研究吉祥草提取物对人结肠癌HT-29细胞的体外增殖抑制作用和诱导凋亡作用.方法 MTT法筛选吉祥草乙醇提取物及其不同溶剂萃取部分对HT-29细胞抑制作用的活性部位；通过凋亡染色观察细胞凋亡形态；应用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率.结果 吉祥草正丁醇萃取物对HT-29细胞的抑制作用较强,且呈量效和时效关系,作用48 h时IC50值为66.59 mg·L-1,凋亡染色显示有典型的凋亡形态出现,流式细胞仪检测其能诱导HT-29细胞凋亡并呈剂量依赖关系.结论 吉祥草正丁醇萃取物能抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并诱导细胞凋亡.
关键词： 吉祥草 抗肿瘤活性 细胞凋亡 人结肠癌HT-29细胞 -
熊果酸对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响
目的:观察熊果酸对Ang-2及Caspase-3在结肠癌细胞中表达的影响,初步探讨熊果酸诱导结肠癌细胞株凋亡的可能机制.方法:培养结肠癌细胞株HT-29,通过MTT法、流式细胞术观察熊果酸对结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Caspase-3及Ang-2在结肠癌细胞株中的表达.结果:MTT实验及流式细胞术显示熊果酸能抑制HT-29细胞的增殖,诱导其凋亡;免疫细胞化学法显示,熊果酸能下调HT-29细胞中Ang-2蛋白的表达,上调Caspase-3蛋白的表达.结论:熊果酸能够抑制HT-29细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与影响Caspase-3和Ang-2蛋白的表达有关.
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扶正解毒祛瘀方联合奥沙利铂对人结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响及机制研究
目的:研究扶正解毒祛瘀方(简称"扶正方")联合奥沙利铂(L-OHP)对人结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响及机制.方法:将HT-29细胞分为空白对照组(不加药物)、扶正方组(1000 mg/L)、L-OHP组(31.25 mg/L)和联合用药组(1000 mg/L扶正方+31.25 mg/L L-OHP).加入相应药物作用48 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中促凋亡基因Bax、抑凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果:与空白对照组比较,L-OHP组和联合用药组细胞增殖均受到抑制、S期和G2/M期细胞比例升高、G0/G1期细胞比例降低(P<0.05),L-OHP组、扶正方组和联合用药组细胞凋亡率升高、细胞中Bax mRNA及蛋白的表达上调、细胞中Bcl-2 mRNA的表达下调(P<0.05),且联合用组变化较两药单用组更明显(P<0.05).结论:扶正方与L-OHP联合应用可抑制HT-29细胞的增殖、促进细胞凋亡,且作用优于两药单用;其机制可能与上调细胞中Bax基因与蛋白表达、下调细胞中Bcl-2基因表达有关.
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鞘磷脂水解产物对结肠癌细胞中碱性鞘磷脂酶的影响
背景与目的:碱性鞘磷脂酶(alk-SMase)是鞘磷脂(SM)新陈代谢和发挥抑制结肠癌作用的关键酶.通过体外实验探讨SM的水解产物的神经酰胺(Cer)和鞘氨醇(Sph)对人结肠癌细胞HT-29中alk-SMase表达的影响. 材料与方法:分别用12.5、25、50 μmol/L的C_2-Cer和Sph处理HT-29细胞12、24、48 h后,分别用Western blot法和RT-PCR检测细胞中alk-SMase的蛋白水平和mRNA表达水平的变化.实验并设DMSO溶剂对照组. 结果:C_2-Cer·和Sph作用HT-29细胞后,其alk-sMase蛋白及其mRNA的表达下调.结论:Cer和Sph对HT-29细胞中alk-SMase的表达具有负反馈调节作用.
关键词： 神经酰胺 鞘氨醇 碱性鞘磷脂酶 人结肠癌HT-29细胞
