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槲皮素对H2O2致内皮细胞损伤的保护作用
目的:探讨槲皮素对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制.方法:采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304,观察内皮细胞加入槲皮素8,4,2 mg·L-1培养24 h后,再加入H2O2培养18h后,造成血管内皮细胞损伤模型.用流式细胞仪测定内皮细胞死亡率,用ELISA法检测内皮细胞培养液血栓调节蛋白(TM)的含量;荧光分光光度法测定内皮细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性.结果:与H2O2损伤后的模型组相比,槲皮素可以减低细胞死亡率,[模型组细胞死亡率为(28.36±0.10)％,槲皮素高、中、低剂量分别为(8.34±0.01)％,(16.58±0.04)％,(10.12±0.02)％],可使培养液中TM蛋白含量减少,[模型组为(58.5±18.8)μg·L-1,槲皮素高、中、低剂量为(32.7±9.7),(27.8±1.9),(32.1±8.6) μg·L-1]和LDH活性减少[模型组为(1 931.9±159.5) U·L-1,槲皮素高、中、低剂量为(1.092±126.2),(1 159.6±274.2),(1 223.5±120.5)U·L-1].结论:槲皮素能明显保护过氧化氢对内皮细胞的损伤,其保护作用与抗脂质过氧化、保护细胞的完整性有关.
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槲皮素抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及与Wnt/β-catenin信号通路的机制
目的:观察槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖和Wnt/ β-连环蛋白( β-catenin)信号通路的调控作用,探讨其抗前列腺癌的可能机制.方法:体外培养PC-3细胞,以不同终浓度槲皮素进行处理,设空白组.采用噻唑蓝比色法(MTT)观察槲皮素对PC-3细胞增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测槲皮素对PC-3细胞凋亡的影响;采用免疫印迹法(Western blot)和逆转录-PCR(RT-PCR)分析检测槲皮素对β-catenin和下游靶基因细胞周期素D1(Cyclin D1),原癌基因(c-Myc)蛋白表达和转录水平;采用免疫荧光分析检测槲皮素对β-eatenin表达的影响;利用荧光酶报告基因分析检测槲皮素对Wnt/β-eatenin信号通路的影响.结果:与空白组比较,槲皮素对PC-3细胞增殖具有明显抑制作用(P＜0.05),并诱导PC-3细胞凋亡(P＜0.05).与空白组比较,槲皮素可显著抑制PC-3细胞β-eatenin的蛋白表达和转录活性,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路的传导,抑制下游靶基因的表达水平(P ＜0.05,P＜0.01).结论:槲皮素可显著抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与抑制Wntt/β-eatenin信号通路有关.
关键词： 前列腺癌 槲皮素 Wnt/β-连环蛋白信号通路 细胞周期素D1 原癌基因 -
采用析因设计方法研究槲皮素和没食子酸对芒果苷镇咳作用的影响
目的:芒果苷、槲皮素和没食子酸都是芒果叶的主要成分,含量均超过2％.本研究探讨芒果苷分别与槲皮素、没食子酸合用时,在镇咳作用上是否存在交互影响.方法:小鼠40只,雌雄各半,随机分为生理盐水组,生理盐水+芒果苷组(0.1 g·kg-1),生理盐水+槲皮家组(0.1 g·kg-1),生理盐水+芒果苷+槲皮素组(0.1 +0.1 g·kg-1),每组10只,采用浓氨水致咳的小鼠模型研究镇咳作用,记录小鼠3 min内的咳嗽次数.采用析因方差分析判断药物间是否存在交互影响.结果:与生理盐水组比较,芒果苷组有镇咳作用(P＜0.05),槲度素组和没食子酸组则无(P＞0 05).芒果苷+槲应素组的镇咳作用明显强于芒果苷组(P＜0 01)；芒果苷+没食子酸组的镇咳作用与芒果苷组相当(P＞0.05).结论:芒果苷和槲皮素合用,有协同镇咳作用,能明显提高芒果苷的镇咳药效.芒果苷与没食子酸之间没有交互影响,两者合用,只表现出芒果苷的镇咳药效.
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槲皮素壳聚糖复合膜治疗大鼠口腔溃疡的研究
目的:制备槲皮素壳聚糖复合药膜(quercetin chitosan composite film QUCS),观察其对口腔溃疡愈合过程的影响并探讨其作用机制.方法:以壳聚糖(chitosan,CS)为成膜材料,加入槲皮素(quercetin,QU)制成口腔溃疡复合膜.制备大鼠口腔溃疡模型,随机分为基质组(CS,不加槲皮素的膜8 mg/片)、复合膜(QUCS 0.2 mg/片)组、冰硼散(BPS 0.2 mg/溃疡面)组和空白对照组.各药均2次/d,直至溃疡完全愈合为止.观察每组溃疡鼠的一般状况、溃疡愈合速度、溃疡感染情况.观察QUCS对二甲苯所致小鼠耳肿胀及对热板法所致小鼠疼痛的影响.结果:与对照组比较,QUCS组平均愈合时间(6.24±1.35)d、平均愈合速度(3.13±0.44)mm2·d-1、溃疡周围感染程度明显缩短或减轻(P＜0.01).在溃疡表面感染程度、溃疡平均愈合时间上QUCS组和BPS组之间无统计学差异.与对照组比较,QUCS对二甲苯所致小鼠耳肿胀及对热板法所致小鼠疼痛有明显的抑制作用(P＜0.01),180 min仍有强的镇痛作用.结论:QUCS对NaOH所致大鼠口腔溃疡具有明显的治疗作用,其机制可能是通过降低溃疡表面充血水肿及良好的镇痛作用实现的.
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槲皮素对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠氧自由基和一氧化氮的影响
目的:观察槲皮素对糖尿病大鼠超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(N0)及一氧化氮合酶(NOS)的影响,分析槲皮素对糖尿病大鼠的肾脏保护机制.方法:采用一次性腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型.将大鼠随机分为3大组,每组再设2个小组(n=8):正常组(A1,A2),糖尿病模型组(B1,B2),槲皮素治疗组(C1,C2),分别于槲皮素(50 mg·kg-1·d-1)ig治疗6周和12周后处死取双肾,计算各组大鼠肾脏肥大指数；一肾用苏木精-伊红染色,光镜下观察肾小球病理形态学变化；另一肾测定其内SOD活性、MDA、NO含量及NOS活力的变化.结果:槲皮素治疗12周肾脏肥大指数(6.99±0.58) ×10-3,与模型组(8.92±0.66) ×10-3相比明显降低(P＜0.05).槲皮素治疗6周和12周肾组织SOD活性(165.31±14.89),(148.33±13.22) U· mL-1,与模型组(149.02±17.21),(121.32±15.33)U· mL-1相比明显升高(P＜0.05)；MDA含量(17.89 ±2.88),(19.46 ±3.02)μmo1· L-1,NOS活性(15.13 ±2.89),(17.65±2.46) ng· L-1,NO含量(0.42 0.12),(1.41±0.48) μmol· L-1,与模型组MDA含量(19.68±3.01),(21.12 ±2.99)μmol· L-1,NOS活性(18.23 ±2.42),(21.22±3.01) ng· L-1,NO含量(0.73 ±0.25),(1.91±0.35) μmol· L-1相比明显下降(P＜0.01)；且明显改善肾小球病理变化.结论:槲皮素可通过增加氧自由基的清除,抑制NOS的活性及NO的含量保护糖尿病肾脏.
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槲皮素对U937细胞迁移和侵袭能力及MMP-2,MMP-9表达的影响
目的:观察槲皮素(quercetin)对人急性髓系白血病(human acute myeloid leukemia)U937细胞增殖、凋亡、黏附力、迁移和侵袭能力及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响.方法:体外培养U937细胞,分别以0,10,20,40 μmol·L-槲皮素处理24,48,72 h,细胞计数试剂盒(cellcounting kit-8,CCK-8)检测槲皮素对U937细胞增殖的抑制作用.实验随机分为空白组,槲皮素10,20,40 μmol·L-组.末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测U937细胞凋亡情况;细胞黏附实验检测U937细胞黏附力;划痕修复实验检测U937细胞迁移能力;transwell小室体外侵袭实验检测U937细胞侵袭能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测U937细胞MMP-2,MMP-9蛋白表达.结果:槲皮素可抑制U937细胞的增殖.与空白组比较,槲皮素10,20,40 μmol·L-1组明显升高U937细胞凋亡指数(P＜0.05,P＜0.01).与空白组比较,槲皮素10,20,40 μmol·L-1组明显降低U937细胞黏附率,迁移率,侵袭细胞数及MMP-2,MMP-9蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:槲皮素可显著抑制U937细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与其抑制MMP-2和MMP-9表达有关.
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HPLC同时测定忍冬与红腺忍冬中3种成分的含量
目的:建立同时测定忍冬与红腺忍冬中绿原酸、芦丁和槲皮素的HPLC分析方法.方法:依利特Hypersil ODS (4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.05％磷酸梯度洗脱,检测波长327 nm,柱温25℃,进样10μL,流速1.0 mL· min-1.结果:线性范围内3种成分的标准曲线呈良好的线性关系,加样回收率在97％～101％,精密度和重复性的RSD均符合定量分析要求.结论:该方法准确、简便,具有良好的重复性和稳定性,可用于忍冬及红腺忍冬药材的质量控制.
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HPLC同时测定维吾尔族药复方小艾飞中5种有效成分的含量
目的:建立HPLC同时测定复方小艾飞中槲皮素、山柰素、乔松素、高良姜素4种黄酮类成分及胡椒碱含量的方法.方法:采用Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以乙睛(A)-1％磷酸溶液(B)-甲醇(C)为流动相,梯度洗脱(0～12 min,28％A∶52％B∶20％C;12～13 min,28％ ～30％A,52％ ～50％B,20％C;13～45 min,30％A∶50％B∶20％C),流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,进样量20 μL,检测波长280 nm.结果:槲皮素、山柰素、乔松素、高良姜素、胡椒碱的标准曲线分别为Y=357314X-88 066(r =0.999 9),Y=442 853X-74 204(r =0.999 9),Y=647 926X-327 436(r =0.999 9),y=471 672 X-256 408(r=0.999 9),Y=290 000X-391 906(r=0.999 9),线性关系良好.平均加样回收率(n=9)分别为98.4％(RSD 1.6％),98.9％ (RSD 1.7％),101.3％ (RSD 2.2％),98.6％ (RSD 2.1％),98.6％ (RSD 1.8％).结论:该方法准确、简便,具有良好的重复性,可用于维吾尔族药复方小艾飞的质量控制.
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HPLC程序可变波长法测定绞股蓝中芦丁、人参皂苷Rb1和槲皮素
目的:建立绞股蓝药材中芦丁、人参皂苷Rb1和槲皮素的含量测定方法.方法:TSK ODS-100V(4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱；流动相乙腈-0.1％磷酸(30∶70),流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,进样量10 μL,检测波长(0 ～ 14 min,257nm;14 ～ 18 min,203 nm;18 ～30 min,257 nm).结果:芦丁、人参皂苷Rb1和槲皮素分别在0.171 2～1.284 0μg、0.828 0～6.210 0 μg,0.204 8～ 1.525 7μg线性关系良好,回归方程分别为Y=732 927.570 1 X+1 523.016 4,r=0.9998、Y=158 991.787 4X +307.545 6,r=0.999 9,Y=745 728.515 6X +2 101.1668(r =0.999 8),平均加样回收率分别为97.33％(RSD 2.02％),98.6t％ (RSD 1.70％),98.38％(RSD 2.59％).结论:所建立的方法准确性高,重复性好,可作为绞股蓝药材的质量控制方法.
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梅花配方颗粒中4种黄酮类成分含量测定
目的:建立HPLC测定梅花配方颗粒中芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素含量的方法.方法:PhenomenexSynergi C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.1％磷酸(B)梯度洗脱,柱温30℃,体积流量1.0 mL·min-1,检测波长360 nm.结果:芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素线性范围分别为0.230 2 ～2.877 5μg(r =0.999 2),0.1348～1.6850μg(r=0.999 5),0.195 4 ～2.442 5μg(r =0.999 1),0.033 8 ～0.422 5 μg(r =0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率分别为98.39％,98.71％,100.00％,100.57％;RSD分别为1.7％,1.4％,1.8％,2.0％.结论:该测定方法简便快捷、准确、重复性好,为梅花配方颗粒的质量控制和评价提供了依据.
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HPLC测定芒萁中槲皮素和山柰素的含量
目的:建立HPLC测定芒萁中槲皮素和山柰素含量的方法,并测定不同产地芒萁中槲皮素和山柰素含量.方法:分别用不同体积分数的甲醇和乙醇做为槲皮素和山柰素的提取溶剂,采用超声、回流两种方法提取槲皮素和山柰素,采用高效液相色谱法,Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相甲醇-0.1％磷酸水(54:46),流速1.0 mL· min-,柱温30℃,检测波长366 nm.结果:槲皮素和山柰素用80％甲醇回流提取率较高,江西鹰潭的芒萁中槲皮素和山柰素含量较高.芒萁中槲皮素、山柰素分离效果良好,线性范围分别为1.051 ～16.24,0.505～ 8.08 μg.结论:该法准确灵敏、稳定可靠,可用于芒萁的质量控制,不同产地芒萁中槲皮素及山柰素含量差别较大.
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HPLC测定急性子中总黄酮的含量
目的:建立HPLC测定急性子中总黄酮含量的方法.方法:采用Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm)；流动相甲醇-0.4％磷酸水(55∶45),检测波长365 nm,柱温30℃,流速1.0 mL· min-1.结果:槲皮素、山柰酚、异鼠李素的线性范围分别为0.111 2～0.5560(r=0.9994),0.007 711 ～0.023 23(r =0.999 4),0.006 69～0.033 45 μg(r=0.999 2)；平均加样回收率分别为98.5％(RSD 1.3％,n=6),97.3％(RSD 1.7％,n=6),97.6％ (RSD 1.6％,n=6).结论:该方法准确度高,重复性好,可用于急性子中总黄酮的含量测定.
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HPLC测定地锦草中没食子酸、槲皮素及山柰素含量
目的:建立同时测定地锦草药材中槲皮素、山柰素和没食子酸含量的高效液相色谱法.方法:采用Agilent TCC18(4.6 mm×150mm,5μm)柱分离,以甲醇和0.4％磷酸水溶液进行梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL?min -1.结果:没食子酸在0.051 8 ～0.621 6μg线性关系良好,平均回收率在102.17％ (RSD2.83％),槲皮素在0.070 2 ～0.702 0 μg线性关系良好,平均回收率在97.80％( RSD 2.42％),山柰素在0.020 4～0.408 0μg线性关系良好,平均回收率在98.02％( RSD2.72％).结论:操作简便,准确度高,重复性好,可作为地锦草质量控制方法之一.
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HPLC测定刺梨中杨梅素和槲皮素的含量
目的:建立同时测定中药刺梨中杨梅素和槲皮素含量的HPLC分析方法.方法:采用Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm× 150 mm,5 μm),以甲醇-0.4％磷酸溶液为流动相,流速1.0 mL.min-1；检测波长368 nm.结果:杨梅素和槲皮素分别在0.036 2 ～0.253 7μg,0.056～0.196 μg峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9999);平均加样回收率分别为98.32％,98.84％,RSD分别为2.18％,1.78％.结论:该方法简便、准确、重现性好,可用于中药刺梨的质量控制.
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HPLC同时测定不同产地荷叶饮片中4种黄酮成分
目的:采用HPLC同时测定荷叶饮片中4种黄酮类成分的含量,为制定荷叶饮片的质量标准提供实验依据.方法:采用Kromasil C18(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-o.2％磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱(0～8 min,10％ ～40％ A;8 ～ 23 min,40％ ～70％A;23～30 min,70％ ～ 85％A),流速1 mL·min-,柱温30℃,二极管阵列检测器,检测波长360 nm.结果:槲皮素-3-0-桑布双糖苷、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素的线性范围依次为6.10 ～ 97.60,18.76 ～ 300.16,8.48～135.68,9.12 ～145.92 mg·L-1,平均回收率(n=6)依次为100.98％(RSD 1.85％),99.05％(RSD 1.48％),99.29％(RSD 1.84％),97.71％ (RSD 1.78％).5个不同产地荷叶饮片中槲皮素-3-0-桑布双糖苷、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素的含量分别为0.092％ ～0.161％,0.949％ ～1.862％,0.067％ ～0.133％,0.040％ ～0.062％.结论:该方法简便快速,准确可靠,可作为荷叶饮片中4种黄酮成分的含量测定方法.不同产地荷叶饮片中上述4种黄酮成分含量相差较大,建议将黄酮成分纳入荷叶饮片的质量控制标准.
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清平片中黄酮类成分定量分析
目的:建立清平片中黄酮类成分槲皮素、葛根素、芦丁的含量测定方法,为清平片质量控制研究提供参考.方法:超声提取方法处理样品,采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.05％三氟乙酸进行梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,检测波长247 nm.结果:葛根素在0.003 6～0.114 0 g·L-1(r=0.999 8),芦丁在0.003 3 ～0.105 0 g·L-1(r=0.999 6),槲皮素在0.003 2 ～0.102 0 g·L-1(r =0.9997)呈良好的线性关系,葛根素,芦丁,槲皮素平均回收率分别为99.60％,99.86％,99.94％,RSD分别为0.4％,0.3％,0.2％.结论:该方法快速、简便、重复性好,稳定,可控,可用于清平片黄酮类成分的含量测定.
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苗族药夜关门的质量标准
目的:建立苗族药夜关门的薄层鉴别与含量测定方法.方法:采用薄层色谱法,以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10∶8∶1)为展开剂,建立了其定性鉴别方法;采用高效液相色谱法,以槲皮素为对照,Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm ×200 mm,5 μm),流动相乙腈-0.20％磷酸溶液(20∶ 80),二极管矩阵检测器,建立了其含量测定方法.结果:建立的TLC能很好分离各成分,HPLC能够准确测定苗药夜关门中槲皮素的含量.结论:该文所建立的TLC,HPLC方法可用于苗药夜关门质量检测.
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野牡丹中槲皮素的测定
目的:建立野牡丹主要成分的含量测定方法.方法:样品加入甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)混合溶液进行水解,采用RP-HPLC方法测定水解后产生的槲皮素.色谱柱为Shimpack VP-ODS(4.6 mm×150 mm,5μm)C18以甲醇-0.4%磷酸水溶液(50∶50)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为360nm.结果:槲皮素在21.2～169.6μg·mL-1线性关系良好(r=0.9995),平均回收率为96.3%,RSD 1.54%.结论:方法简便、准确,可靠,可用于野牡丹中槲皮素的含量测定.
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关于完善《中国药典》2010年版炒槐花质量标准的研究
目的:建立炒槐花中总黄酮、芦丁、槲皮素含量限度要求,为完善2010年版药典中该饮片的质量标准提供实验数据.方法:采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量.采用HPLC测定芦丁和槲皮素的含量,均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；芦丁的流动相为甲醇-1％冰醋酸溶液(32∶68)；槲皮素的流动相为甲醇-水-冰醋酸(44:56∶0.4)；检测波长均为257 nm.结果:炒槐花(花)中总黄酮、芦丁、槲皮素含量均不得低于8％,6％,0.35％；炒槐花(花蕾)中总黄酮、芦丁、槲皮素含量均不得低于20％,16％,0.3％.结论:本文方法简便易行、重复性好、结果准确,所制定炒槐花的质量标准提高了该饮片的质控水平,为其临床应用的安全性和有效性提供了实验数据.
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HPLC同时测定小蜡树叶中槲皮素与山奈素的含量
目的:建立同时测定小蜡树叶中槲皮素与山奈素含量的分析方法.方法:采用HPLC,色谱柱为Ultimate C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.4％磷酸溶液(55∶45)为流动相,流速1.0 mL· min-1,检测波长360 nm.结果:小蜡树叶中槲皮素与山奈素的线性范围分别为0.058 ～0.525 μg和0.203 ～0.712 μg,平均加样回收率分别为103.0％,107.6％(n=6).结论:该方法准确可靠,结果稳定,重复性好,为评价小蜡树叶的质量提供依据.
