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基于BAF/GM细胞株法检测生长激素生物活性研究
目的 探讨基于BAF/GM细胞株法检测生长激素(GH)生物活性的可行性,为临床检测GH生物活性提供参考方法.方法 选取2011年7月-2013年12月新疆医科大学第一附属医院儿科收治的特发性身材矮小(ISS)患儿42例(ISS组),另选取同期本院预防保健科体检健康儿童52例(对照组).建立BAF/GM细胞株,常规培养于DMEM高糖培养基.培养液洗涤后转移到含10％马血清的培养基中培养16 h.采用含10％马血清的培养基重悬细胞,调整细胞浓度为3 ×105个/ml,混匀后取100μl滴在96孔板中.稀释标准GH溶液至终浓度为0.01～1 000.00μg/L,取10μl标准GH溶液滴加到96孔板中,培养22 h.每孔加入22μl反应液,继续培养3h,在490 nm处测定吸光度(OD)值.绘制OD值与GH生物活性当量关系的标准曲线.采用含10％马血清的培养基配制促甲状腺激素(100 mU/L)、黄体生成素(10000U/L)、卵泡刺激素(10 000 U/L)、催乳素(100U/L)、成纤维细胞生长因子(1 000 μg/L)、表皮生长因子(100 μg/L)、人类胰岛素样生长因子1(IGF-1,10μg/L)、氢化可的松(100 μg/L)、诺和灵R (1.0 U/L)、L-甲状腺素钠(643.5 nmol/L),同时每孔加标准GH溶液5μl(20μg/L)进行干扰实验.采集两组受试者空腹静脉血,采用放射免疫分析法(IRMA)测定血清GH水平;灭活血清标本,以MTS法测定490 nm处OD值,代入标准曲线计算血清GH生物学活性当量.结果 GH生物活性当量与OD值关系的标准曲线为Y=0.8520ln(X) +0.498 8,R2=0.969 8,其中X为GH生物活性当量,Y为OD值.加入促甲状腺激素、黄体生成素、卵泡刺激素、催乳素、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、IGF-1、氢化可的松、诺和灵R和L-甲状腺素钠后测得OD值分别与标准GH溶液比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).两组受试者GH水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).ISS组GH生物活性当量、GH生物活性低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 基于BAF/GM细胞株法是潜在的检测GH生物活性的良好方法,且具有一定的抗干扰能力.
