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中药制剂对血吸虫性肝纤维化病理及超微结构的影响
目的:观察中药制剂对血吸虫肝纤维化病理及超微结构的影响.方法:应用鼠日本血吸虫病模型,第7周用吡喹酮杀虫后喂以中药制剂,分别于用药不同阶段对肝组织相应变化进行光镜、电镜观察.结果:感染血吸虫后,光镜下肝细胞变性坏死程度与胶原纤维分布明显.经中药制剂治疗后,肝组织病变明显减轻.电镜观察感染未治疗组贮脂细胞、枯否氏细胞增多,胶原纤维分布广泛.经中药制剂治疗组,上述细胞及胶原纤维相应减少.结论:中药制剂可以减轻病变程度,抑制肝纤维化的进展.
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日本血吸虫童虫cDNA文库免疫学筛选及H1基因的克隆
目的获取可能编码新的血吸虫诊断和候选疫苗分子的cDNA克隆. 方法利用血吸虫病患者的血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,获得一批阳性克隆,并对H1克隆插入片段的核苷酸进行序列测定.根据结果,一方面进行同源性分析;另一方面设计合成引物,应用PCR法进行扩增,并将其克隆入pGEM-T载体. 结果用抗血清初筛约7.2×103个重组的噬菌体,得到12个持续阳性反应克隆,其中H1克隆的插入片段长度为1 186 bp,具有一个591 bp的完整开放阅读框,与现有的基因无任何同源性.利用PCR法成功地扩增了该基因,并克隆入载体pGEM-T. 结论从cDNA文库中筛选的对血吸虫感染可能具有保护作用的分子克隆是可行的,为进一步研究提供了基础.
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日本血吸虫谷胱甘肽转移酶基因在真核表达载体中的亚克隆
目的将日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)基因片段克隆到真核表达载体pBK CMV中,以便对其进行核酸疫苗的研究.方法特定寡核苷酸引物的设计和合成,TRIZOL试剂提取日本血吸虫成虫RNA,RT-PCR法扩增GST基因编码序列,将扩增产物连接pGEM-T克隆载体,再亚克隆到真核表达载体pBK CMV中.结果 RT-PCR法特异性扩增出SjGST编码基因片段,其大小约为670 bp,经双酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pGEM-T-GST和pBK CMV-GST中含有目的基因.结论 pBK CMV-GST重组质粒的成功构建,为进一步表达GST及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件.
