首页 > 文献资料
-
胞外DNA在根管白色念珠菌生物膜中作用的研究
目的 动态观察根管内白色念珠菌生物膜形成过程,通过DNaseⅠ对生物膜形成的影响,研究胞外DNA在根管内白色念珠菌生物膜形成过程中的作用.方法 在2.0cm2载玻片上形成白色念珠菌生物膜,并在生物膜形成至不同时间用DNaseⅠ处理,AO/EB染色,极光共聚焦显微镜观察生物膜的形态变化,并用XTT减低法定量分析DNaseⅠ作用前后生物膜内细胞的生长活性.结果 DNaseⅠ对根管内白色念珠菌生物膜形成有抑制作用.结论 胞外DNA在根管内白色念珠菌生物膜形成过程中有着重要的作用.
-
白色念珠菌生物膜中胞外DNA分布观察
目的:动态观察白色念珠菌生物膜形成过程中胞外DNA的分布情况.方法:在2.0cm2载玻片上形成白色念珠菌生物膜,用核酸染料对膜中的胞外DNA进行染色,激光共聚焦显微镜下观察不同培养时间的生物膜中胞外DNA的分布.结果:白色念珠菌生物膜中含有胞外DNA.结论:白色念珠菌生物膜中含有胞外DNA,随培养时间延长,生物膜内胞外DNA的增加,分布在活菌的周围.
-
表皮葡萄球菌AtlE蛋白介导生物膜起始黏附的相关机制
目的 探讨表皮葡萄球菌atlE基因编码的AtlE蛋白介导生物膜起始黏附的相关机制.方法 采用RT-PCR法检测表皮葡萄球菌atlE基因在不同时期的表达水平,用紫外分光光度计检测DNA的方法检测了相应时期的胞外DNA的释放量,并用DNA酶(DNase Ⅰ)研究表皮葡萄球菌胞外DNA在生物膜形成和起始黏附中的作用;采用 pBT2质粒同源重组敲除的方法构建了表皮葡萄球菌1457的atlE基因突变株,研究atlE基因敲除突变对起始黏附能力、生物膜形成及胞外DNA释放能力的影响.结果 表皮葡萄球菌atlE基因的表达与胞外DNA的释放量有相关性;DNA酶能影响未成熟生物膜且能降低起始黏附能力;ΔatlE 菌株胞外DNA的释放减少,起始黏附能力明显降低,不形成生物膜.结论 表皮葡萄球菌atlE基因编码的AtlE蛋白能通过释放胞外DNA在表皮葡萄球菌的生物膜起作用.
-
Benzonase酶对金黄色葡萄球菌生物膜的影响
目的 研究Benzonase酶对金黄色葡萄球菌eDNA的降解作用,并对生物膜含量及其内细菌数量的影响.方法 凝胶电泳分析Benzonase酶对eDNA的降解作用;结晶紫染色测吸光值(A570)观察生物膜含量的变化;平板菌落计数法检测生物膜内细菌数量的变化;光镜下观察生物膜形态的变化.结果 Benzonase酶能将eDNA完全降解;当酶浓度超过0.2 U/ml时,生物膜的含量和其内细菌数量下降不再发生变化;光镜下生物膜的形态发生明显变化.结论 Benzonase酶能高效降解eDNA,极微量浓度的Benzonase酶就可以使金黄色葡萄球菌生物膜的含量和其内的细菌数量大幅下降.
关键词： 金黄色葡萄球菌 细菌生物膜 Benzonase酶 胞外DNA -
胞外DNA在细菌生物膜形成中的作用
细菌生物膜是微生物在生长过程中为了适应生存环境而形成的与浮游细胞相对应的存在形式[1].细菌生物膜的特殊结构和其对耐药性的影响是造成很多慢性顽固性感染的原因[2].胞外DNA来自于死亡细菌体裂解释放或活菌主动分泌,是细菌生物膜胞外基质中的重要成分之一.在多数种类的细菌生物膜中,尤其是致病菌所形成的生物膜,胞外DNA起到了促进生物膜形成的作用[3](如铜绿假单胞菌[1]、表皮葡萄球菌[4]、金黄色葡萄球菌[5]、肺炎链球菌[6]、脑膜炎奈瑟菌[7]、淋病奈瑟菌[8]、单核细胞增多性李斯特菌[9]和部分真菌如白色念珠菌[10]).然而,近几年对新月柄杆菌的研究提示,某些细菌所形成的生物膜或者在某些特定情况下,胞外DNA亦可限制生物膜的形成,这可能与胞外DNA的片段长度有关,亦或者是由于新月柄杆菌的特定生活周期所致[11].生物膜中的活菌可摄取基质中的胞外DNA并整合入其染色体DNA,这是生物膜中水平基因转移的主要方式,如毒力因子和耐药基因的传播.而不能用于基因转化的异源性DNA可作为细菌生长的营养物质.本文旨在总结生物膜中胞外DNA的结构作用,以及胞外DNA的来源和去路(基因转化、营养作用).
-
胞外DNA在急性呼吸窘迫综合征小鼠炎症损伤中的作用
目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)小鼠胞外DNA的生成情况及其对肺部炎症损伤的作用.方法 以LPS(6 mg/kg)经鼻气管滴注法建立ARDS模型.40只雄性C57 BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、DNase Ⅰ组、LPS组和LPS+ DNase I组,每组10只.造模后24 h取肺组织行HE染色观察肺组织病理改变;取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)检测细胞数量,采用超敏荧光核酸染料检测其中双链DNA浓度;采用ELISA检测BALF中白介素石(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)浓度.结果 LPS组小鼠肺组织HE染色可见大量中性粒细胞浸润、肺泡结构破坏、肺泡出血及间质水肿,提示LPS诱导ARDS建模成功.LPS组BALF中细胞计数、MPO、IL-6、TNF-α和双链DNA浓度均分别显著高于对照组(P＜0.05),LPS+DNase Ⅰ组肺损伤评分和炎症指标均较LPS组显著降低(P＜0.05).结论 LPS诱导ARDS小鼠BALF中胞外DNA浓度升高,而DNase Ⅰ能够降低ARDS小鼠BALF中DNA浓度,减轻肺部炎症损伤.
-
胞外DNA是耻垢分枝杆菌生物被膜的主要成分
目的 本实验以无致病性的耻垢分枝杆菌Mc2155为结核分枝杆菌模型菌进行生物被膜成分研究.方法 利用24孔细胞培养板建立体外耻垢分枝杆菌生物被膜培养模型:借助DNase Ⅰ作为eDNA抑制剂分析其在生物被膜的存在情况,通过结晶紫染色对生物被膜进行定量;早期加入外源基因组DNA对生物被膜的影响进行评估;利用荧光显微镜考察SYTOX(R) orange标记生物被膜的主要成分胞外DNA(eDNA).结果 体外培养的耻垢分枝杆菌Mc2155能形成典型生物被膜;早期加入DNase Ⅰ明显抑制了生物被膜的产量;早期加入基因组DNA有利于提高生物被膜产量.特异染料SYTOX(R) orange能对耻垢分枝杆菌生物被膜染色,说明eDNA是耻垢生物被膜的主要成分.结论 本研究首次证明eDNA是耻垢生物被膜的主要成分,这为治疗分枝杆菌感染和耐药控制提供了新的思路.
-
胞外DNA在根管粪肠球菌生物膜中作用的研究
目的:通过激光共聚焦显微镜(CLSM)观察脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase Ⅰ)对根管内粪肠球菌生物膜形成过程的影响,以研究胞外DNA在此生物膜形成过程中的作用.方法:在盖玻片上建立粪肠球菌生物膜模型,并在生物膜形成的不同时间,用DNase Ⅰ处理,AO-EB染色,激光共聚焦显微镜观察生物膜的形态变化.结果:生物膜中胞外DNA随着生物膜的生长而增多;在有无DNase Ⅰ存在的两种环境下,生物膜的形成情况发生了迥异的变化;DNase Ⅰ对生物膜的生长具有抑制作用.结论:胞外DNA在根管内粪肠球菌生物膜形成过程中有着重要的作用.
-
PED相关粪肠球菌生物膜中胞外DNA作用的研究
目的 就PED相关粪肠球菌生物膜中胞外DNA作用进行研究.方法 选择根管治疗术失败或者被诊断为顽固性根尖周炎的单根管牙,并且提取根管内粪肠球菌,鉴定粪肠球菌,制备粪肠球菌菌液,配制核酸染液.结果 实验组在培养24h后基本都没有菌胞附着,而对照组却出现了较为密集的成熟生物膜结构.在PED相关龚肠球菌生物膜的形成过程中,胞外DNA会发挥出极为重要的作用.结论 胞外DNA能够成为攻克PED相关粪肠球菌生物膜的新靶点,具有极为突出的作用效果.
-
胞外DNA对细菌生物膜形成调控作用的研究进展
细菌生物膜与感染性疾病、抗生素耐药等病理生理发生机制有着密切联系,使得细菌生物膜的形成机制及胞外物质成分的研究成为当今研究热点,细菌生物膜胞外物质成分中目前已经分离确定的的种类主要有无机离子、蛋白质、多糖还有DNA.细菌胞外DNA对细菌生物膜生长的作用是双向的,文章针对几种细菌胞外DNA对细菌生物膜的生长调控进行综述,为寻找消除细菌生物膜的新思路提供理论依据.
