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特发性间质性肺炎蛋白质组学研究及Annexin Ⅱ表达验证
目的 应用蛋白质组学方法筛选出特发性间质性肺炎(idiopathic interstitial pneumonia,IIP)相关蛋白质,为阐明IIP的发病机制和预后提供理论依据.方法 收集8例通过局部麻醉小切口开胸肺活检获取的新鲜肺组织及5例远离肺部良性病变的肺组织,采用双向凝胶电泳(2-DE)分离组织总蛋白,运用Imagemaster 2D 5.0图像分析软件识别差异表达的蛋白质点,应用基质辅助电离解析飞行时间质谱获取肽质量指纹图谱,检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点,明确其生物学功能.利用Western blot和RT-PCR技术检测差异蛋白在IIP患者肺组织和正常肺组织的表达.结果 建立双向电泳图谱,鉴定出7个表达量有明显差异的蛋白质点,包括热休克蛋白70、AnnexinⅡ和Haptoglobin等.Western blot和RT-PCR技术证实IIP组AnnexinⅡ表达下调,与2-DE结果一致.结论 建立重复性较好的IIP患者肺组织与正常肺组织双向电泳图谱,并鉴定出一些与IIP发病机制相关的蛋白质.本实验所证实的AnnexinⅡ差异表达蛋白质可能通过引起纤溶系统的失衡来参与IIP的发生和发展,从而为进一步阐明IIP的发病机制提供重要方法和新线索.
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肺腺癌血清肿瘤标志物的筛选与鉴定
目的：应用蛋白质组学方法筛选肺腺癌患者血清中的肿瘤标志物。方法收集8例肺腺癌患者及8例正常人血清，剔除血清中白蛋白干扰后，得到血清可溶性总蛋白并采用双向电泳方法分离，获得血清蛋白质的双向电泳图谱，经PDQuest7.1凝胶图像软件分析找出表达差异的蛋白点，经基质辅助电离解析飞行时间质谱检测获得待测蛋白的肽质量指纹图谱，通过搜寻蛋白质数据库鉴定出肺腺癌血清中候选的肿瘤相关蛋白。结果建立了肺腺癌患者及正常人血清蛋白质表达谱。经软件匹配分析，共筛选出24个差异的蛋白点，从中选出差异显著的7个蛋白点进行质谱分析，经数据库查询分析，成功的鉴定出5种蛋白质：凝聚素、触珠蛋白、血清淀粉样蛋白A、血清白蛋白A链、纤维胶凝蛋白3。结论本研究建立了人肺腺癌患者及正常人血清的双向电泳图谱；鉴定出了若干肺癌相关蛋白质，为进一步寻找肺癌蛋白标志物奠定了基础。
关键词： 肺腺癌 血清 双向凝胶电泳 基质辅助电离解析飞行时间质谱 蛋白质组 -
异体异位发育睾丸组织的蛋白质组图谱构建及差异蛋白分析
目的 应用蛋白质组学实验方法对在异体异位生长发育的新生小鼠睾丸组织进行差异蛋白分析,从而对睾丸组织体外移植模型用于生精细胞发育研究的可行性提供进一步的理论依据.方法 以新生小鼠睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植,移植8周后收集移植物组织,采用双向凝胶电泳(2-DE)分离移植物组织总蛋白,同时分离8周正常小鼠睾丸组织总蛋白作对比分析,运用ImageMaster 2D Elite 5.0图像分析软件识别移植物组织与正常组织差异表达的蛋白质点,应用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点.结果 正常睾丸组织和移植物组织双向电泳图谱的平均蛋白质点数分别为(1326±15)个和(1561±20)个,3次重复实验的蛋白质点位置重复性较好.通过比较两者的双向凝胶电泳图谱,得到表达差异量较大的蛋白质点21个.选取6个仅在正常睾丸组织中有表达的蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定出的6种蛋白质,除血红蛋白α1链(Hbα-α1)外,其他5种蛋白均为在小鼠睾丸中有较高表达的蛋白质,包括A激酶锚定蛋白结合的精子蛋白(ASP)、磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、精子蛋白(Sp17)、天门冬酰胺酶样蛋白(ASRGL1)和过氧化物氧化还原因子4(Prdx4).结论 在本实验中,从异体异位生长发育成熟的新生小鼠睾丸组织中检测到5种在睾丸中特异性高表达蛋白质的缺失,这些蛋白质主要在精子运动、精子顶体形成以及精子的受精等功能中发挥作用.
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特发性间质性肺炎蛋白质组学初步研究
目的 应用蛋白质组学的方法筛选出特发性间质性肺炎(IIP)相关蛋白质,为阐明IIP的发病机制和预后提供理论依据.方法 收集8例通过小切口开胸肺活检获取的新鲜肺组织及5例远离肺部良性病变的肺组织.提取组织总蛋白,运用固相PH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)技术分离组织总蛋白,图象分析软件识别差异表达的蛋白质点,运用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点,明确其生物学功能.结果 建立双向电泳图谱,质谱分析鉴定出7个差异表达的蛋白质,分别为热休克蛋白70、膜联蛋白Ⅱ和触珠蛋白等.结论 建立了重复性较好的IIP与正常肺组织的双向电泳图谱,并鉴定出一些与IIP发病机制相关的蛋白质,为进一步寻找IIP特异分子标志物和靶向治疗打下坚实的基础.
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苯比芘作用于16HBE气道上皮细胞的蛋白质组学研究
目的 应用蛋白质组学方法筛选出苯比芘(BaP)作用过的16HBE气道上皮细胞(处理组)与正常16HBE气道上皮细胞(对照组)的差异表达蛋白质,为阐明BaP对人体气道的致癌机制提供理论依据.方法 培养人气道上皮细胞16HBE,并用BaP进行处理,采用双向凝胶电泳(2-DE)分离细胞总蛋白,运用ImageMaster 2D Elite 5.0图象分析软件识别差异表达的蛋白质点,应用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质点,明确其生物学功能.结果 建立双向电泳图谱,找出15个表达量有明显差异的蛋白质点,其中包括转酮醇酶、埃兹蛋白及泛素-蛋白酶体等与肿瘤发病密切相关的蛋白质.结论 建立重复性较好16HBE人气道上皮细胞双向电泳图谱,并鉴定出一些与肿瘤发病机制相关的蛋白质,为阐明BaP对人体气道的致癌机制提供理论依据.
