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淋巴瘤TCRγ及TCRβ克隆性基因重排分析
T淋巴细胞免疫球蛋白受体包括αβ和γδ两组,共涉及到相应的4条基因重排并编码合成.检测淋巴组织中这4处基因重排为克隆性还是非克隆性,可以鉴别组织中淋巴细胞是克隆性增生的瘤细胞还是非克隆性反应性增生的淋巴组织,对淋巴瘤的诊断有重要意义[1-2].
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血液系统肿瘤患者外周血细胞IgH基因和TCRγ基因的检测及意义
检测各种血液系统肿瘤患者外周血细胞免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体γ基因(TCRγ)克隆性重排并探讨其意义.通过多聚酶链式反应(PCR)方法检测32例非霍奇金淋巴瘤(NHL)、18例急性髓性白血病(AML)、24例多发性骨髓瘤(MM)、8例急性淋巴细胞白血病(ALL)及6例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血细胞IgH及TCRγ克隆性基因重排.结果表明,NHL、AML、MM、ALL及CLL患者中IgH克隆性重排率分别为37.50%、22.22%、83.33%、12.50%和16.67%;TCRRγ基因克隆性重排率分别为62.50%、50.00%、54.17%、50.00%及50.00%.在B型、T型NHL中,IgH克隆性重排率分别为31.58%及66.67%;TCRγ克隆性重排率分别为47.37%及66.67%.AML中IgH克隆性重排阳性者的初治完全缓解率(CR)(50.00%)与IgH重排阴性的初治CR率(50.00%)无显著差异(P>0.05).TCRγ克隆性重排阳性者与阴性者的初治CR率(均为44.44%)亦无显著差异(P>0.05).IgH及TCRγ基因克隆性重排不具有细胞谱系的特异性,但通过检测外周血IgH、TCRγ克隆性基因重排对NHL有辅助诊断意义,并且可作为监测微小残留病壮(MRD)的手段.
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特发性红皮病患者石蜡包埋组织TCRγ基因重排分析
目的:检测特发性红皮病患者石蜡包埋皮肤组织T细胞受体(TCR)γ基因重排.方法:提取特发性红皮病患者石蜡包埋组织DNA 28份,利用BIOMED -2系统TCRγ引物组合进行TCRγ基因重排检测,以28例银屑病患者石蜡包埋组织作为阴性对照.结果:特发性红皮病患者石蜡包埋组织TCRγ基因重排阳性率为7.1％,对照组阳性率为0.结论:部分TCRγ基因重排阳性特发性红皮病患者可发展成T细胞淋巴瘤.
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VR1012-TCRγV1真核表达载体的构建
目的:构建含TCRγV1基因的重组表达载体.方法:从人淋巴瘤Jurkat细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA克隆入VR1012质粒;转化感受态细菌E.Coli DH5e,以通用引物PCR扩增筛选阳性克隆,并双酶切鉴定;小量提取质粒进行测序.结果:测序结果证实重组载体中的外源片段序列与GenBank中TCRγV1序列完全相符.结论:成功构建了含TCRγV1基因的重组表达载体.
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pcDNA3/TCRγV1真核表达载体的构建及表达
目的:构建含TCRγV1基因的真核表达质粒并检测其在小鼠骨骼肌中的表达.方法:从人淋巴瘤Jurkat细胞中提取RNA,用RT-PCR法扩增含BamH Ⅰ与HindⅢ酶切位点的TCRγV1基因序列,将TCRγV1基因PCR产物插入pcDNA3后转化到大肠杆菌DH5α,阳性克隆酶切鉴定后测序分析.大量提取质粒,股四头肌注射法免疫小鼠,RT-PCR法检测小鼠肌肉中TCRγV1mRNA的表达.结果与结论:pcDNA3/TCRγV1重组质粒构建成功,并能在小鼠骨骼肌中表达.
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PCR检测TCRγ基因重排技术的临床应用
非霍奇金淋巴瘤(NHL)的病理诊断与鉴别诊断是临床病理诊断中的难题,误诊率很高.Ig抗体的克隆性表达只能确定部分B淋巴瘤的诊断.T淋巴瘤尚无克隆性表达抗体.
