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PDK1在内皮细胞向造血细胞转换中的作用研究
目的 研究磷酸肌醇依赖性激酶1 (PDK1)在内皮细胞向造血细胞转化阶段对造血干细胞(HSC)发生的影响.方法 应用Vec-Cre在内皮细胞中特异性敲除PDK1基因,取对照组PDK1fl/fl、PDK1fl/+小鼠及敲除组Vec-Cre;PDKIfl/fl小鼠胚胎的主动脉-性腺-中肾区(AGM区)细胞进行集落形成实验,检测PDK1基因对造血祖细胞功能的影响;取对照组和敲除组AGM区细胞行移植实验,检测PDK1对HSC功能的影响;取对照组和敲除组AGM区细胞,通过流式细胞术检测PDK1对能够向造血转化的CD31 +c-Kitugh细胞群比例、细胞周期及细胞凋亡的影响;分选对照组和敲除组AGM区CD31+c-Kithigh细胞群,通过Real-time PCR检测PDK1对内皮向造血转换相关的转录因子(RUNX1、P2-RUNX1、GATA2)的影响.结果 PDK1敲除后,造血祖细胞形成的克隆形态变小,数目减少[敲除组CFU-GM为(24±5)个/ee,对照组为(62±1)个/ee,P=0.001];破坏了造血干细胞重建造血及多向分化的能力(敲除组移植5只,0只重建,对照组移植7只,5只重建,P=0.001);AGM区CD31 +c-Kithigh比例降低[敲除组CD31+c-Kithigh曲比例为(0.145±0.017)％,对照组比例为(0.385±0.04)％,P=0.001];并且AGM区由内皮细胞向造血细胞转换的关键转录因子表达下降,但对CD31 +c-Kithigh细胞的增殖和凋亡无明显影响.结论 在内皮细胞中特异敲除PDK1基因,导致具有向造血转化的内皮细胞群比例降低,影响了HSC的发生,破坏了HSC重建造血的能力.
