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ETO转录抑制结构域的分析与鉴定
目的进一步确定ETO抑制基因转录的区域及其与组蛋白脱乙酰化酶之间的关系.方法以位点诱变法使ETO的两个锌指结构分别突变,使用聚合酶链反应扩增ETO突变体,克隆入真核细胞表达质粒pFA-CMV中.通过基因转染、报告基因转录活性分析,确定ETO的不同区段对基因转录调节的作用.结果成功构建出锌指突变和不同区段的ETO表达载体,并发现ETO存在两个抑制转录的区域,分别位于羧基末端的两个锌指结构和第275～487位氨基酸残基.结论 ETO通过2个区域抑制转录,并且与组蛋白脱乙酰化酶密切相关,后者可能会用作急性髓系白血病M2b的治疗靶点.
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核受体辅助抑制因子中ETO结合结构域的确定
目的为消除急性髓系白血病标志基因AML1/ETO的活性,确定核受体辅助抑制因子(nuclear receptor co-repressor,N-CoR)与ETO基因相互作用的活性部位.方法用PCR扩增不同区段的N-CoR(N-CoRY),克隆入酵母表达质粒pGADGL中,构建获得pGADGL/N-CoRY.应用酵母双杂交技术及X-gal染色确定pGADGL/N-CoRY 10个区段的N-CoR是否与ETO结合.结果 N-CoR的988～1126氨基酸残基与1551～1801氨基酸残基共存时,才能与ETO发生结合作用,是与ETO相互作用的结构域.结论 N-CoR两个结构域能与ETO的两个锌指结构作用,保持两种蛋白之间的稳定结合.
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ETO在白血病发病机制中的研究进展
血液系统恶性肿瘤常伴随相关的非随机染色体的异常,这种遗传学异常在白血病的发病、进展中起重要作用.AML中t(8;21)易位是常见的核型异常之一,形成AML1-ETO融合蛋白.目前认为此融合蛋白主要是通过ETO基因的多个结构域与核受体转录共抑制物(N-COR)/组蛋白去乙酰化酶(HDAC)复合体作用以显性负模式阻滞AML1的转录激活,从而阻滞造血细胞的分化,在t(8;21)白血病中起重要作用.此外,AML1-ETO还能抑制PLZF的功能,使得正常情况下被PLZF抑制的基因解除抑制而表达.还能激活癌基因BCL-2的转录,有可能通过抗凋亡途径参与M2b型白血病的发病.这些都离不开AML1的伙伴基因ETO的作用.本文即是以AML1-ETO为例探讨ETO基因在白血病发病中的可能作用机制.
