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低温对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用及其与Glu受体的关系
目的:探讨低温对离体大鼠海马脑片缺氧无糖(oxygen and glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用及其机制.方法:①观察大鼠海马脑片在OGD条件下顺向群峰电位(orthodromic population spike,OPS)的变化及温度对它的影响.②观察谷氨酸(Glu)对海马脑片OPS的影响及低温的抗Glu毒性作用.并在人工脑脊液(ACSF)中分别加入GABA-R的特异性阻滞剂bicuculline(BMI)和NMDA-R的特异性阻滞剂D-(-)-2-Amino-5-phospho-nopentanoic Acid(AP5)或加入BMI和非NMDA-R阻滞剂6,7-Dinitroquinoxaline-2,3(1H,4H)-dione(CNQX)来观察低温对海马脑片OGD损伤保护作用的突触后受体机制.③观察OGD1h后海马CA1区锥体细胞超微结构的变化及低温对其的影响.结果:①OGD可以使海马脑片OPS迅速降低并很快消失,14 min后复氧供糖OPS极少恢复.低温(32℃、25℃)能使OPS消失时间明显延长,复氧供糖后OPS恢复良好.25℃其作用优于32℃.②2 mmol/LGlu使海马脑片OPS迅速消失,洗出后难以恢复.低温(3 2℃、25℃)能显著改善去Glu 1h后OPS的恢复.ACSF中加入BMI+CNQX和BMI+AP5均对25℃低温处理28min的脑保护作用没有影响.③OGD1h后CA1区锥体细胞水肿严重,胞浆内细胞器变性坏死脱失,线粒体肿胀,脊呈空泡状.低温(25℃)组细胞核膜规则,线粒体轻度肿胀.结论:低温有显著的抗脑OGD损伤作用,其作用机制可能与抗Glu的兴奋性毒性作用和维持细胞内ATP水平有关.而其抗兴奋性毒性作用可能既有NMDA-R又有非NMDA-R的参与.
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Salvinorin A对原代培养的大鼠皮层神经元缺氧无糖损伤的保护作用及其机制
目的 研究Salvinorin A对原代培养的大鼠皮层神经元缺氧无糖(OGD)损伤的保护作用及其可能的机制.方法 原代培养Sprague-Dawley胎鼠原代皮层神经元.实验分为两个部分,第一部分检测Salvinorin A是否具有神经保护效应,将培养的神经元分为正常对照组、单纯Salvinorin A组(只加入终浓度为10 μmol/L的Salvinorin A,不做OGD)、OGD组和OGD加不同浓度Salvinorin A组(0.1μmol/L组、0.5μmol/L组、1 μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组),检测各组的乳酸脱氢酶(LDH)漏出率.第二部分检测SalvinorinA的神经保护机制是通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)3条途径中的何种途径发挥作用,将原代神经元分为正常对照组、OGD组、OGD+ Salvinorin A组(OGD+SA组)、抑制剂+OGD+ Salvinorin A组[U0126+OGD+SA组、SB200235+OGD+SA组、SP600125+OGD+SA组,U0126为细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路抑制剂、SB200235为P38通路抑制剂,SP600125为c-jun氨基末端激酶通路抑制剂],检测各组的LDH漏出率.结果 第一部分实验:正常对照组的LDH漏出率与单纯Salvinorin A组的差异无统计学意义(P＞0.05),OGD组、0.1 μmol/L组、0.5μmol/L组、1 μmol/L组、5 μmol/L组、10 μmol/L组的LDH漏出率均显著高于正常对照组(P值均＜0.05),1 μmol/L组、5 μmol/L组、10 μmol/L组的LDH漏出率均显著低于OGD组(P值均＜0.05),0.1 μmol/L组、0.5 μmol/L组的LDH漏出率与OGD组的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).第二部分实验:U0126+OGD+SA组的LDH漏出率与OGD组的差异无统计学意义(P＞0.05),但显著高于OGD+SA组(P＜0.05);SB200235+ OGD+ SA组、SP600125+ OGD+ SA组的LDH漏出率均显著低于OGD组(P值均＜0.05),但与OGD+ SA组的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 Salvinorin A对大鼠原代神经元OGD损伤具有保护作用,其机制与MAPK/ERK通路有关.
关键词： Salvinorin A 缺氧无糖 神经保护 -
七氟醚对缺氧无糖损伤大鼠海马 NR1亚基mRNA表达的影响
目的探讨七氟醚对缺氧无糖(oxygen and glucose deprivation,OGD)损伤大鼠海马NMDA受体NR1亚基mRNA表达的影响.方法大鼠海马脑片随机分为3组(n=3),用RT-PCR方法检测对照组、缺氧组及七氟醚组大鼠离体海马脑片OGD损伤14 min恢复氧糖供应孵育l、2、4 h后NMDA受体NR1亚基mRNA的表达.结果恢复氧糖供应1、2 h后NR1亚基mRNA的表达3组无明显差异,而缺氧组4 h后NR1亚基mRNA的表达增高,七氟醚组恢复氧糖供应后4 h NR1亚基mRNA的表达明显降低.结论七氟醚可通过下调OGD损伤引起的NR1亚基mRNA的表达发挥脑保护作用.
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二氮嗪预处理大鼠海马脑片抗缺氧无糖损伤作用与激活PKC-ERK1/2通路有关
目的 观察二氮嗪预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的作用及PKC、ERK1/2抑制剂对其的影响.方法 建立大鼠海马脑片OGD损伤模型,分别以25、50、100 μmol·L-1二氮嗪灌流海马脑片30 min,或分别用mitoKATP通道、PKC、ERK1/2抑制剂5-HD、chelerythrine、U0126灌流30 min,再用二氮嗪(100 μmol·L-1)预处理,观察OGD 13 min、复氧1 h后顺向群峰电位(orthodromic population spike,OPS)的变化.结果 二氮嗪预处理组(50、100μmol·L-1)OPS消失时间明显延长,复氧供糖后OPS恢复良好;二氮嗪(10 μmol·L-1)预处理抗OGD损伤作用可被5-HD完全取消,可被chelerythrine或U0126部分取消.结论 mitoKATP通道特异性开放剂二氮嗪预处理有抗海马脑片OGD损伤作用,该效应与激活PKC-ERK信号通路有关.
