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主动载药法制备盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体
目的制备高包封率的盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体.方法处方前研究测定了药物在不同pH值缓冲液中的溶解度和表观油水分配系数;采用pH梯度进行主动载药.超滤法分离脂质体与游离药物,测定包封率,考察了外水相pH值、孵育温度、药脂比对包封率的影响.结果随pH值的增大,盐酸去氢骆驼蓬碱的溶解度降低,表观油水分配系数增大;采用主动载药法,包封率随脂质体内外相pH梯度的减少而降低,受孵育温度的影响不大,在药脂比小于1:5时脂质体包封率达到80%以上.结论主动载药法可制得包封率较高的去氢骆驼蓬碱脂质体.
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聚焦电层析分离牛血清白蛋白和牛血红蛋白
本文借鉴聚焦层析的原理,研究聚焦电层析分离牛血清白蛋白和牛血红蛋白的方法.在充填阴离子交换葡聚糖凝胶DEAE-Sephadex A-50的柱中加入pH 5.7缓冲液平衡,再加入pH 3.0缓冲液形成pH梯度.在柱的两端施加电场,正极在上端,负极在下端.蛋白质在pH梯度内移动时,所带电荷发生变化,所受电场力也改变,移动速度的差异增大,牛血清白蛋白和牛血红蛋白可以完全分离,回收率为90%以上.操作时要注意调节pH梯度范围,以避免蛋白质沉淀析出.这种方法简便,价廉,适用于分离等电点不同的蛋白质.
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鼻咽癌细胞株HNE-1蛋白质二维电泳图谱的建立
目的建立及优化聚丙烯酰胺二维凝胶电泳技术,结合分析软件,全面展示鼻咽癌细胞株HNE-1的蛋白质表达谱,为进一步开展鼻咽癌的蛋白质组学研究奠定了基础.方法大规模培养HNE-1细胞,利用优化的蛋白质抽提技术获得HNE-1细胞的总蛋白.选用线性及非线性的不同pH梯度固相(IPG)干胶条对细胞总蛋白等电聚焦以及聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳,初步建立了HNE-1细胞株总蛋白质的二维电泳(2-DE)图谱.结果采用不同pH梯度范围的IPG胶条和优化的2-DE技术能够有效展示HNE-1细胞全蛋白质表达谱.结论重叠窄pH梯度范围的IPG胶条提高了2-DE中蛋白质的分离效果.
