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神经神经病靶标酯酶文献资料
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人神经病靶标酯酶RNAi表达载体的构建及其对哺乳动物细胞中NTE表达的抑制
目的构建人神经病靶标酯酶(NTE)双链RNA的稳定表达载体.方法用Spe Ⅰ和XhoⅠ将pSUPER质粒中的H1 RNA聚合酶Ⅲ启动子及多克隆位点部分切下替换pcDNA3.1(+)载体中的巨嗜细胞病毒(CMV)启动子及其多克隆位点,构建了适合在哺乳动物细胞中表达具有干涉作用的小RNA的载体pSUPER/neo,进而将针对NTE表达的双链DNA插入到BglⅡ和HindⅢ酶切的载体pSUPER/neo中构建NTE的双链RNA表达载体pSUPER/neo-NTE,后者被转染到COS7和SH-SY5Y细胞中,采用蛋白质杂交和酶活力测定的方法,检测其表达效率并验证载体构建的正确性.结果构建了适合在真核细胞用抗生素筛选的NTE双链RNA表达载体pSUPER/neo-NTE.蛋白质杂交检测显示,转染细胞能有效抑制外源性NTE的表达;酶活力测定则显示其能有效地抑制内源性NTE的表达.结论采用启动子替换的策略,成功构建了NTE双链RNA的表达载体并在哺乳动物细胞内有效抑制NTE的表达.
