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基因组提取文献资料
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隐孢子虫卵囊基因组的提取及以保守基因为靶标的PCR检测
目的 探讨提高PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法 的特异性和敏感性,为防止隐孢子虫病流行提供检测依据.方法 应用BALB/c小鼠感染扩增卵囊,不连续蔗糖密度梯度离心法从粪便中纯化卵囊,通过冻融和超声法破碎卵囊,然后以酚/氯仿/异戊醇法提取基因组DNA作为PCR扩增模板,根据隐孢子虫保守基因18S rRNA,设计一对特异性的引物,扩增约450 bp的目的 片段.结果 超声处理法对隐孢子虫卵囊的破囊率为92%,明显高于冻融法的86%.2个组抽提的DNA作为模板均扩增出目的 片段,但超声处理组敏感性高于冻融处理组,分别能检测到卵囊2个/mL和20个/mL.结论 超声法对微小隐孢子虫卵囊的破碎效果优于冻融法,经改进的PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法 具有特异性好和敏感性强的特点.
关键词： 隐孢子虫卵囊 基因组提取 18S rRNA基因 PCR -
短小棒状杆菌CpG-DNA提取方法的研究
目的:建立一种高效纯化CP-CpG-DNA的方法,为研究DNA免疫增强佐剂功能奠定基础.方法:应用经超声破碎、蛋白酶K消化、CTAB沉淀及酚、氯仿抽提等步骤从短棒杆菌(Corynebacterium parvum,CP)中提取基因组DNA(CP-CpG-DNA).结果:琼脂糖凝胶电泳检测,CP-CpG-DNA主要集中在2.3 Mb;CP-CpG-DNA经限制性内切酶HpaⅡ酶切后,琼脂糖凝胶电泳检测,得到小于1000bp的片断.结论:建立的高效纯化CP-CpG-DNA方法.获得的CP-CpG-DNA纯度较好,而且CP-CpG-DNA中存在大量非甲基化CpG位点,可用于DNA免疫增强佐剂的应用.
