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尿道致病性大肠杆菌fimA基因的克隆与表达
目的 对尿道致病性大肠杆菌(UPEC)132编码Ⅰ型菌毛的结构基因fimA进行克隆与表达,建立免疫学检测方法.方法 采用PCR方法扩增fimA基因,定向克隆pET32a载体,原核表达获得FimA重组蛋白；免疫小鼠制备FimA多克隆抗体；建立全菌ELISA方法,检测UPEC 132的Ⅰ型菌毛表型.结果 PCR扩增imA全基因,构建重组质粒pET32a-fimA,经转化构建重组菌E.coli BL21(DE3)/pET32a-fimA；经IPTG诱导表达及镍亲和层析纯化获得重组蛋白FimA；制备的FimA多克隆抗体效价≥1:51 200,Western blot显示其良好的特异性；全菌ELISA获得满意结果.结论 成功地克隆UPEC Ⅰ型菌毛的结构基因fimA,制备的多克隆抗体为UPEC的检测和致病性的研究奠定了基础.
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不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌与慢性牙周炎相关性的研究
目的检测不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌在我国慢性牙周炎患者中的分布状况,及其与牙周炎的相关性.方法收集101例慢性牙周炎患者的龈下菌斑,采用P.gingivalis 16S rRNA和5种fimA基因型的特异引物,用PCR法检测不同fimA基因型P.gingivalis的分布;记录取样牙六个位点(近颊、颊正中、远颊、近舌、舌正中、远舌)的牙周临床指标,包括牙周探诊深度,临床附着丧失和探诊出血.结果16S rRNA PCR,P.gingivalis 检出率为88.1%.大多数受检牙龈下菌斑只检测出一种fimA基因型(65.1%),ⅡfimA的总检出率高为43.8%,其次为ⅣfimA,检出率为40.4%;ⅡfimA型和ⅣfimA型P.gingivalis在轻中度和重度牙周组的检出率均高.结论ⅡfimA型和ⅣfimA型P.gingivalis是我国牙周炎患者龈下菌斑中的优势菌株,表明ⅡfimA型和ⅣfimA型P.gingivalis与我国人群牙周炎的发生发展密切相关.
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维吾尔族慢性牙周炎中牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA毒力基因型的分布
目的:分析维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA毒力基因型的分布情况.方法:收集52例维吾尔族慢性牙周炎患者的龈下菌斑,采用16S rRNA PCR法检测牙龈卟啉单胞菌,并根据菌毛fimA毒力基因型的特异引物,用聚合酶链反应(PCR)检测Ⅱ型fimA和Ⅳ型fimA菌株的分布.结果:16S rRNA PCR法检测牙龈卟啉单胞菌在龈下菌斑中阳性检出率是76.9%.牙周袋PPD＞6 mm位点龈下菌斑标本的P.gingivalis检出率高于4＜PPD≤6 mm采样的位点,2组差异有统计学意义(P＜0.05).牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA毒力基因型在牙龈卟啉单胞菌感染者的检出率分别是:ⅡfimA型为37.5%,ⅣfimA型为22.5%.结论:维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌有较高的检出率.牙龈卟啉单胞菌存在fimA毒力基因多态性.
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青少年正畸治疗患者牙龈卟啉单胞菌及其毒力因子FimA基因型的变化研究
目的:分析牙龈卟啉单胞菌(Pg)及其毒力因子FimA在青少年正畸患者治疗过程中的变化.方法:随机收集青少年需正畸患者中牙龈健康者61例,分别采集正畸矫治器粘戴前及粘戴后第1、2、3、6个月时的龈沟液样本,并记录其牙龈指数,用16S rDNAPCR技术检测各样本中Pg及其毒力因子FimA(6种类型)的表达,并对实验数据进行统计学分析.结果:与矫治前相比,矫治后3个月Pg和FimA基因Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ型均显著增加(P＜0.05).Pg和6种基因型的阳性检出率在佩戴矫治器前3个月呈增长趋势,并在第3个月时达到高水平,随后开始下降;到第6个月时,Ⅰ、Ⅰ b型恢复到了矫治前的状态.%及Ⅰ、Ⅰb、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ型与牙龈指数呈正相关关系(P＜0.05).结论:青少年患者在正畸治疗过程中,矫治器戴入早期可导致Pg及FimA各基因型的增加,诱发牙龈炎症.
