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DNA损伤剂对携带乳腺癌易感基因1功能位点突变细胞的毒性作用研究
目的 通过比较携带乳腺癌易感基因1(BRCA1)的RING或BRCT功能区内位点突变的乳腺癌细胞系(HCC1937)对不同来源DNA损伤的应答反应的敏感性,探讨BRCA1的RING和BRCT两功能区在DNA损伤反应中所起的作用.方法 选择RING和BRCT功能区内与肿瘤发生相关的突变位点C64G和P1749R进行研究,应用BRCA1缺欠的HCC1937细胞系建立稳定表达C64G位点突变(C64G)、P1749R位点突变(P1749R)、野生型BRCA1 (wtBRCA1)以及vector(空载体空白对照)4种细胞系,并用Western blotting法测定各细胞系BRCA1蛋白的表达.分别对4种细胞系进行电离辐射处理(一次性给予2、4、6 Gy的X射线),丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)处理(0.2、1、5μg/ml孵育1h),紫外线(ultraviolet,UV)处理(一次性给予2、4、6 J/m2)继续培养48 h,并设空白对照.通过3H-TdR掺入实验、MTT实验和细胞克隆形成实验研究细胞3H-TdR掺入率和细胞存活率的变化.结果 与空白对照组比较,不同剂量电离辐射、MMC、UV处理后,4种细胞系的3H-TdR掺入率均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);且随着暴露剂量的升高,4种细胞系的3H-TdR掺入率均呈下降趋势.与wtBRCA1相比,相同剂量电离辐射、MMC、UV处理C64G、P1749R、vector细胞系的3H-TdR掺入率和细胞存活率均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05),但C64G、P 1749R细胞系的3H-TdR掺入率和细胞存活率与vector细胞系的变化趋势基本一致.结论 BRCA1的RING和BRCT功能区的位点突变均可导致细胞对电离辐射、MMC和UV所致DNA损伤的敏感性升高,而且C64位点比P1749对各种损伤应答反应更为敏感.提示这两个功能区可能参与了不同的DNA损伤修复过程并起到关键的调控作用.
