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反式脂肪酸对人脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响
目的 研究油酸( oleic acid,OA)及其反式异构体反油酸(elaidic acid,EA)对人成熟脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响.方法 原代培养人脂肪组织来源的间质干细胞(human adipose tissue-derived stromal cells,hATSCs),诱导分化为成熟脂肪细胞,分别暴露于0(对照)、1、5、25 μmol/L的OA和EA溶液72 h.采用实时定量PCR(real time PCR)方法 检测脂联素mRNA的相对表达水平.结果 与对照组比较,当人成熟脂肪细胞暴露于5、25 mol/L OA时,脂联素mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；当人成熟脂肪细胞暴露于1、5、25 μmol/L EA时,脂联素mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).且人成熟脂肪细胞脂联素mRNA表达水平随着OA染毒浓度的升高而下降,随着EA染毒浓度的升高而上升.与相同暴露剂量的OA组比较,EA暴露组人成熟脂肪细胞脂联素mRNA表达水平均高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 OA具有抑制人成熟脂肪细胞脂联素mRNA表达的作用,而EA具有增强作用.
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免疫受体NOD1在人脂肪细胞胰岛素抵抗形成中的作用
目的 研究免疫受体核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1(NOD1)在人脂肪细胞胰岛素抵抗形成中的作用,并探讨其可能的作用机制.方法 将人前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,加入NOD1受体激动剂iE-DAP,利用双萤光素酶报告系统检测NF-κB转录活性,酶联免疫吸附法检测炎症细胞因子水平,2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法观察脂肪细胞的葡萄糖摄取率,蛋白免疫印迹检测胰岛素受体底物1(IRS-1)、蛋白激酶B(Akt)磷酸化及磷酸肌醇3激酶(PI-3K)p85的蛋白表达水平.结果 iE-DAP促进人脂肪细胞NF-κB转录活性(P＜0.05),刺激炎性细胞因子白细胞介素(IL)-6、IL-8及单核细胞趋化因子1的分泌(均P＜0.01).iE-DAP显著抑制胰岛素刺激状态下人脂肪细胞的葡萄糖转运(P＜0.05),呈时间剂量效应.iE-DAP处理脂肪细胞,IRS-1 307位丝氨酸磷酸化水平明显升高,PI-3K p85蛋白表达显著降低,并抑制胰岛素诱导的Akt 473位丝氨酸和308位苏氨酸磷酸化水平(均P＜0.05).结论 NOD1介导的炎症反应参与人脂肪细胞胰岛素抵抗的发生,其机制可能与其抑制IRS-1、PI3-K、Akt信号通路有关.
关键词： 核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1 胰岛素抵抗 人脂肪细胞 iE-DAP 炎症 -
hsa-miR-1908靶基因预测及生物信息学分析
目的对hsa-miR-1908进行系统的生物信息学分析，预测其可能参与的生物学过程及信号通路，为深入研究其在人脂肪细胞分化、肥胖发生等过程中的功能与机制奠定基础。方法应用miRBase获取hsa-miR-1908的序列，并分析其特征；应用miRanda预测hsa-miR-1908的靶基因，并取预测结果及基因芯片结果的交集，进一步进行基因功能注释（Gene ontology）和生物通路富集分析（Pathway enrichment)。结果 hsa-miR-1908在各物种之间有一定保守性，其靶基因功能富集于Wnt受体信号的调控、细胞周期、细胞凋亡等生物学过程；其靶基因信号通路富集于促性腺激素释放激素信号通路、MAPK信号通路、胰岛素信号通路、细胞周期等信号转导通路及胰腺癌等疾病通路中。结论 hsa-miR-1908预测的靶基因集合富集于多个信号通路及生物学过程，与肥胖密切相关，为后续has-miR-1908在人脂肪细胞中生物学功能研究奠定基础。
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miR-26b过表达对不同时间点人脂肪细胞分泌脂因子的影响
目的：探讨miR-26b过表达在人脂肪细胞分化过程中对各种脂因子分泌的影响。方法以miR-26b过表达病毒感染人脂肪前体细胞并诱导分化；收集不同时间点的细胞培养基上清，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各个时间点的脂因子（白介素-6、瘦素、抵抗素、肿瘤坏死因子-α）分泌量。结果与对照组比较，在miR-26b过表达病毒感染的人脂肪前体细胞分化过程中，白介素-6、瘦素分泌量降低，而抵抗素分泌量升高；两组均未检测到肿瘤坏死因子-α。结论 miR-26b在一定程度上可以改善人脂肪细胞炎症状态及改善胰岛素抵抗，为肥胖治疗提供潜在靶点。[临床儿科杂志,2013,31(10)：914-916]
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糖尿病血瘀证与脂肪细胞糖摄取关系的临床研究
中医学认为,血瘀证贯穿糖尿病的整个发展过程.本研究在细胞实验的基础上,对临床病例进行血瘀证的中医辨证以及临床资料的搜集,以进一步探讨糖尿病血瘀证状态对脂肪细胞糖摄取的影响.
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hsa-miR-26b沉默载体的构建及验证
目的 构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果.方法 用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用.结果 成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致；real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75％；双荧光素报告系统验证其对靶基因无抑制作用(P＞0.05).结论 成功构建hsa-miR-26b沉默载体,并验证其对靶基因PTEN无抑制作用.
关键词： hsa-miR-26b 海绵体载体 双荧光素报告系统 人脂肪细胞 -
miR-146b靶标预测及功能分析
目的 通过对miR-146b进行系统的生物信息学分析,预测miR-146b的靶基因及其功能.方法 应用miRBase获取并分析miR-146b的序列特征；应用TargetScan、PicTar及miRanda预测miR-146b的靶基因,进行功能注释和信号转导通路分析；应用PubMed、Google等信息搜索工具综述miR-146b已有功能研究.结果 miR-146b在各物种之间具有高度保守性.功能注释显示预测靶基因主要富集于促细胞增殖、转录调控、调控细胞分化等生物学过程.信号转导通路分析显示预测靶基因显著富集于白血病、ErbB信号通路、促分裂原活化的蛋白激酶通路等.结论 生物信息学分析提示,miR-146b可能与细胞分化、代谢密切相关.
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人miR-17-92cluster慢病毒载体构建及其在人脂肪细胞的表达验证
目的 构建人miR-17-92 cluster慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果.方法 以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR扩增包含miR-17-92 cluster所在区域上下游100 bp左右的基因组DNA,克隆入慢病毒表达载体,与Pcgvp、Rev、Vsvg包装质粒共转染HEK-293T细胞包装病毒,收取病毒上清液感染人脂肪细胞.36 h开始观察荧光标记,72 h收取细胞,抽提RNA,RT-PCR检测miR-17-92 cluster各miRNA及miR-103、let-7e的表达.结果 成功构建人miR-17-92 cluster慢病毒表达载体.包装获得的病毒感染人脂肪细胞的效率可达到75％以上,miR-17-92 cluster各miRNA的过表达效率均达到2倍以上,且没有干扰miRNA内源性成熟机制.结论 成功构建了人miR-17-92 cluster慢病毒表达载体.包被的慢病毒可以在人脂肪细胞中实现了该cluster的过表达效果,为研究人miR-17-92 cluster在人脂肪细胞中的功能提供参考.
关键词： miR-17-92cluster 慢病毒载体 人脂肪细胞 -
hsa-miR-335靶基因预测及生物信息学分析
目的 对hsa-miR-335进行系统的生物信息学分析,预测hsa-miR-335可能参与的生物学过程,为本研究小组深入研究其在脂肪细胞分化中的功能和机制奠定基础.方法 通过miRbase获取并分析hsa-miR-335序列特征；应用TargetScan,PicTar及miRanda预测hsa-miR-335的靶基因,并结合已证实的靶标基因,进行功能注释(GeneOntology)和Pathway富集分析(Pathway Enrichment).应用NCBI Mapviewer、UCSC Genome Browser等工具对hsa-miR-335进行启动子相关预测.结果 miR-335在各物种之间具有高度保守性,其靶基因功能富集于胰腺外分泌、脂质激酶活性调控、wnt受体信号的调控、细胞周期等生物学过程(P＞0.01),其靶基因信号通路富集于促性腺激素释放激素信号通路、MAPK信号通路、胰岛素信号通路、细胞周期等信号转导通路(P＜0.05).启动子预测提示hsa-miR-335为基因内miRNA,在基因组上下游10kb以内存在CpG岛,转录起始位置(TSS)、Poly A信号、转录因子结合位置(TFBS).结论 hsa-miR-335预测的靶基因集合富集于多个生物学过程,与肥胖密切相关,并可能存在其独立的转录调控机制.为后续miR-335在肥胖人脂肪细胞中生物学功能研究奠定基础.
