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壳聚糖基因纳米粒子对L02细胞的作用
目的 研究壳聚糖基因纳米粒子(CNP)、精氨酸化壳聚糖基因纳米粒子(ANP)和十六烷基化壳聚糖基因纳米粒子(HNP)对人正常肝细胞系L02细胞的作用.方法 采用复凝聚方法制备CNP、ANP和HNP,粒度及zeta电位分析仪进行纳米粒子表征.将浓度分别为5、10、30、50μg/ml(以DNA含量计)的各种纳米粒子与L02细胞共育,采用MTT法进行细胞毒性评价,流式细胞分析技术进行细胞凋亡检测.结果 CNP、ANP和HNP的zeta电位为12.10～14.63 mV,粒径约为148.07～179.47 nm.当各基因纳米粒子浓度为30 μg/ml时,细胞存活率开始降低;达到50μg/ml时,存活率降至低.当各基因纳米粒子浓度为30μg/ml时,可以诱导L02细胞发生凋亡,随纳米粒子浓度的升高,凋亡率升高.结论 当达到一定浓度时,CNP、ANP和HNP对L02具有一定细胞毒性,可诱导细胞产生凋亡.
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壳聚糖作为基因输送载体的新研究进展
基因治疗是一种非常有前景的医学治疗技术,然而目前尚不能广泛地应用于临床,安全高效的基因输送载体的缺乏是其临床推广应用的主要限制因素之一.壳聚糖作为一种天然存在的阳离子多聚物,具有较好的生物相容性和生物降解性,可以与DNA通过快速混合形成纳米颗粒,从而具有作为基因输送载体的重大潜力.就壳聚糖作为基因输送载体的新研究进展进行系统综述,重点讨论纳米粒子进入体内后需要跨越的各个生物屏障以及如何克服这些生物屏障.
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精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子对血小板GMP-140表达的影响
目的 考察精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子(ACGN)对血小板GMP-140表达的影响.方法 制备精氨酸修饰的壳聚精(ACS)并朋红外光谱对其进行表征;用共沉降的方法制备精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子,用凝胶电泳阻滞实验对精氨酸修饰壳聚精与DNA的相互作用进行研究;用酶联免疫双抗夹心法测定血小板α颗粒膜蛋白-140(GMP-140)表达来考察精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子对血小板激活的影响.结果 红外光谱结果显示精氨酸成功地接枝到壳聚糖上,在正负电荷比≥2:1时,ACS能完全阻滞DNA的迁移,表明所有的DNA均已被ACS完全包覆.壳聚糖基因纳米粒子(CGN)和ACGN在体外均不引起血小板的激活,但在体内则都引起轻微血小板激活.结论 精氨酸修饰壳聚糖纳米粒子对血小板GMP-140的表达没有引起明显的变化,有望成为一种新型的、安全的非病毒基因载体.
关键词： 壳聚糖 基因纳米粒子 血小板α颗粒膜蛋白-140 -
壳聚糖基因纳米粒子的细胞摄入和体外毒性研究
用分子量为50 kDa和400 kDa的壳聚糖分别和[α-32P]dATP标记的质粒DNA,在不同的N/P比下,通过复凝聚方法形成基因纳米粒子.对形成的壳聚糖基因纳米粒子(Chitosan gene nanoparticle, CGN)进行表征,评价CGN体外细胞毒性,研究两种壳聚糖形成的基因纳米粒子被A10和K562细胞摄入的量和速度.结果表明:(1)随着壳聚糖分子量和N/P比的增大,形成的基因纳米粒子更易于进入细胞,同时显示纳米粒子的zeta电位与细胞摄入量之间存在关联性;(2)壳聚糖基因纳米粒子的毒性远远小于商品化的细胞转染试剂Lipofectamine 2000.
