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miRNA-133b-3p对PC12细胞P2rx4的表达调控及细胞钙活动的实验观察
目的:从离体细胞水平观察miRNA-133b-3p调控P2rx4表达对神经元钙活动的影响.方法:用转染试剂将miRNA-133b-3p mimic和miRNA-133b-3p inhibitor转入PC12细胞中.转染48 h后,用荧光定量PCR的方法检测PC12细胞中miRNA-133b-3p的含量,P2rx4 mRNA的表达变化;用免疫印迹的方法检测P2rx4受体蛋白的表达变化;用胞内钙成像技术检测ATP孵育后细胞中钙离子浓度的变化.结果:转染48 h后,与阴性对照组相比,加入miRNA-133b-3p mimic后PC12细胞中miRNA-133b-3p的含量明显增加,P2rx4 mRNA和P2rx4蛋白的表达减少,ATP孵育后细胞中钙离子浓度的升高明显减弱.转染inhibitor后,细胞内miRNA-133b-3p的含量明显减少,P2rx4 mRNA和P2rx4蛋白的表达增加,ATP孵育后胞内钙离子浓度的升高明显增强.结论:miRNA-133b-3p通过负向调控P2rx4的表达来影响细胞钙活动.
关键词： PC12细胞 miRNA-133b-3p P2rx4 钙活动 表达调控 -
CFA致炎大鼠脊髓腰膨大组织内miRNA-133b-3p与P2X4受体表达的实验观察
目的:观察CFA致炎大鼠脊髓腰膨大组织内miRNA-133b-3p与P2X4受体表达的相关关系.方法:大鼠足底注射CFA后,0 h、2 h、1 d、3 d检测大鼠机械痛和热痛的痛阈值变化,且在这四个时间点取脊髓腰膨大组织,提取总RNA和蛋白质,检测miRNA-133b-3p表达量的变化,同时检测P2X4受体mRNA和蛋白的表达量的变化.结果:与对照组相比,大鼠脚掌注射CFA后,机械痛和热痛痛阈均明显下降(P<0.05),在2 h时痛阈低,1 d和3 d时较2 h略有回升;腰膨大部位miRNA-133b-3p表达量在2 h时没有变化,1 d和3 d开始呈现逐渐下降的趋势(P<0.05),四个时间点P2X4受体mRNA表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05),但P2X4受体蛋白在3 d时表达量显著升高(P<0.05).结论:CFA致炎大鼠脊髓腰膨大组织miRNA-133b-3p表达下调,同时P2X4受体表达上调,两者可能存在负向调控关系.
关键词： 慢性痛 CFA 腰膨大 miRNA-133b-3p P2X4受体
