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氯化甲基汞对K562和C6细胞存活率影响的比较研究
目的 细胞毒性试验研究氯化甲基汞和半胱氨酸-氯化甲基汞混合物对K562和C6细胞存活率的影响.方法 体外培养K562和C6细胞24 h,在加入不同剂量氯化甲基汞及氯化甲基汞-半胱氨酸(2.5、5.0、10.0 μm/L)12 h、24 h后,以MTT法检测两种细胞存活率的变化情况.结果 在两种细胞分别加入氯化甲基汞和氯化甲基汞-半胱氨酸后,细胞存活率明显下降.结论 氯化甲基汞对K562和C6细胞的存活率有显著影响,半胱氨酸对氯化甲基汞导致的两种细胞存活率下降趋势无显著影响.
关键词： 氯化甲基汞(MMC) 半胱氨酸(CYS) 细胞存活率 -
高效液相(HPLC)荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度
目的 建立同时测定人血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)等4种硫醇物的高效液相色谱法(highperformance liquid chromatography,HPLC).方法 血浆经磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)稀释后,用三(2羧乙基)膦盐酸盐[tris (2 carboxyethyl) phosphine hydrochloride,TCEP]还原,用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7氟苯呋咱4硫酸铵盐(7 fluorobenzofurazan-4 sulfonic acidammonium salt,SBD F)进行衍生化反应,荧光检测器检测.色谱条件:色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6mm,5 μm),柱温29℃;流动相为甲醇:0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5,3.5:96.5,V/V),流速为0.8 mL/min,等度洗脱.激发波长385 nm,发射波长515 nm.采用外标法定量.结果 Cys、Hcy、CysGly和GSH的线性范围分别为50～800 μmol/L、4～64 μmol/L、10～160 μmol/L和2.5～40μmol/L.Cys、Hcy、CysGly和GSH的低检测浓度分别为2.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.0 μmol/L和1.0 μmol/L.各组分日内、日间精密度RSD均＜12％.平均回收率为95.01 ％～116.17％.结论 该方法具有检测时间短、灵敏性高、精密度和准确度好的特点,适用于临床人血浆中硫醇物浓度的常规检测.
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毛细管电泳电化学法(CE-ECD)检测人全血中的同型半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酸(Cys)和还原型谷胱甘肽(GSH)
目的 建立毛细管电泳电化学技术(capillary electrophoresis with electrochemical detection,CE-ECD)检测人全血中同型半胱氨酸( homocysteine,Hcy)、半胱氨酸(cysteine,Cys)和还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)的方法.考察缓冲液的浓度、酸碱度、分离电压、进样时间和检测电压等参数对分离和检测的影响,确定佳的实验条件.方法 以直径为500 μm的铂圆盘电极作为检测电极,用长度为50 cm的熔融石英毛细管对一系列待检物标准溶液和人全血样本进行毛细管电泳电化学检测.结果 在优条件下,当电极电位为+1.05 V(相对饱和甘汞电极)、分离电压为18 kV时,Hcy、Cys和GSH于100 mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.8)中在10 min内获得理想分离.检测下限(S/N=3)在).29～0.80 μmol/L范围内,且在3倍数量级浓度范围内,3种组分的浓度与峰电流呈良好线性关系.对0.5 mmol/L的混合标准溶液连续检测7次,Hcy、Cys和GSH峰高的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为3.7％、3.1％和2.9％.结论 CE-ECD方法可对Hcy、Cys和GSH等3种生物活性巯基化合物进行高效分离及检测,具有分析速度快、成本低、灵敏度高、试剂及样品用量小等优点,因此在生物医药领域具有广泛的应用前景.本实验采用的铂圆盘电极具有污染少、重复性好的特点.
