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SD大鼠肢体缺血-再灌注损伤模型的建立
目的 介绍一种改良的体外闭合阻断股动脉血流的方法,建立简便可控、质量可靠的肢体缺血-再灌注损伤(limb ischemia-reperfusion injury,LIRI)大鼠模型.方法 15只2月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为5个组:正常组,缺血再灌注0 h组、2 h组、4 h组和8 h组.正常组不阻断血流,其余4组构建缺血-再灌注损伤模型,采用HE染色法观察骨骼肌细胞形态学变化,DAPI法检测细胞凋亡.结果 除正常组外,各组均出现不同程度肌纤维肿胀、排列不规则、肌纤维间隙增宽等情况,4 h和8 h两组损伤程度较之0 h和2 h两组显著加重,8 h组损伤程度重,且四组骨骼肌细胞表现出典型的凋亡形态学特征.结论 此方法能反映LIRI过程中骨骼肌的病理变化特点,与LIRI临床特征相似,操作简便、高效,可用于肢体缺血-再灌注动物模型的构建.
关键词： 肢体缺血-再灌注损伤 动物模型 SD大鼠 骨骼肌 -
桃红四物液对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌细胞凋亡的影响研究
目的:观察桃红四物液对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌细胞凋亡的影响.方法:2月龄雄性SD大鼠50只,按随机数字表法分为5组:正常组、缺血再灌注组(IR组)、桃红四物液低剂量组(TD-IR组)、桃红四物液中剂量组(TZ-IR组)和桃红四物液高剂量组(TG-IR组),每组10只.复制肢体缺血再灌注损伤模型,采用HE染色法观察骨骼肌细胞形态学变化,DAPI法检测细胞凋亡.结果:①除正常组外,各组均出现不同程度肌纤维肿胀、排列不规则、肌纤维间隙增宽等情况,较之IR、TG-IR两组,TD-IR、TZ-IR两组损伤较轻,TG-IR组损伤程度重.②IR、TG-IR、TD-IR和TZ-IR 4组骨骼肌细胞凋亡率降较正常组升高(P＜0.05),与IR、TG-IR两组比较,TD-IR、TZ-IR两组细胞凋亡率降低(P＜0.05),且TZ-IR组低、TG-IR组高.结论:一定剂量的桃红四物液能减轻肢体缺血-再灌注损伤,降低损伤骨骼肌细胞的凋亡率,对骨骼肌有一定的保护作用,本实验中中剂量桃红四物液效果佳,高剂量的桃红四物液反可加重肢体缺血再灌注损伤,因此在临床上应严格控制好用药剂量.
关键词： 肢体缺血-再灌注损伤 桃红四物液 骨骼肌 细胞凋亡 -
桃红四物液对大鼠肢体缺血-再灌注损伤炎症因子表达的影响研究
目的:观察桃红四物液对肢体缺血-再灌注损伤(LIRI)大鼠炎症因子表达的影响,探讨其治疗LIRI的作用机制.方法:选用2月龄雄性SD大鼠102只,随机分为5组:对照组、缺血再灌注组(IR组)、桃红四物液低剂量组(TD-IR组)、桃红四物液中剂量组(TZ-IR组)和桃红四物液高剂量组(TG-IR组),各组根据再灌注后不同时间点又分为0、2、4、8h4个亚组.复制右后肢体缺血再灌注损伤,ELISA检测血清中TNF-α和IL-lβ含量变化,RT-PCR检测骨骼肌中TNF-α和IL-1βmRNA水平.结果:①与对照组比较,IR、TD-IR、TZ-IR和TG-IR四组血清中TNF-α和IL-1β表达升高(P＜0.05),其中TD-IR和TZ-IR两组在相同时间点较IR组降低(P＜0.05),TG-IR组较IR组升高(P＜0.05).②与对照组比较,IR、TD-IR、TZ-IR和TG-IR 4组骨骼肌中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平升高(P＜0.05),与IR组比较,TD-IR和TZ-IR两组骨骼肌中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平低而TG-IR组高(P＜0.05).③TNF-α和IL-1β含量在再灌注损伤后2h时间点表达高.结论:①缺血-再灌注损伤模型大鼠TNF-α和IL-1β表达升高.②于再灌注损伤后2h,TNF-α和IL-1β含量达到高峰,在2～8h时间段维持在较高水平,再灌注损伤逐渐加重.③一定剂量桃红四物液能降低缺血-再灌注损伤过程中TNF-α和IL-1β炎症因子水平,降低炎症反应危害,本实验中中剂量桃红四物液效果佳,但剂量过高反而加重肢体缺血再灌注损伤.
关键词： 肢体缺血-再灌注损伤 桃红四物液 骨骼肌 炎症因子 -
桃红四物液对大鼠肢体缺血-再灌注损伤TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响研究
目的 观察桃红四物液对肢体缺血-再灌注损伤(LIRI)大鼠TNF-ot、IL-1β、IL-6表达的影响,探讨其治疗LIRI的作用机制.方法 选用2月龄雄性SD大鼠102只,随机分为5组:正常组、缺血再灌注组(Ischemia Reperfusion,IR)、TD-IR组(IR+I ml桃红四物液+3 ml蒸馏水灌胃)、TZ-IR组(IR+2 ml桃红四物液+2ml蒸馏水灌胃)和TG-IR组(IR+4 ml桃红四物液灌胃),各组根据再灌注后不同时间点又分为0h、2h、4h、8h四个时相组.复制右后肢体缺血再灌注损伤,ELISA检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量变化,RT-PCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达变化.结果 ①与正常组比较,IR、TD-IR、TZ-IR、TG-IR四组血清中TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子表达升高(P＜0.05),其中TD-IR、TZ-IR两组血清中TNF-α、IL-1β含量在相同时间点较IR组降低(P＜0.05),而TG-IR组则升高(P＜0.05).②TD-IR、TZ-IR、TG-IR三组骨骼肌中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平较IR组降低(P＜0.05).结论 ①缺血-再灌注损伤模型大鼠的TNF-α、IL-1β、IL-6表达均升高.②于再灌注损伤后2h,TNF-α、IL-1β、IL-6含量达到高峰,并在2h至8h时间段维持在较高水平,再灌注损伤逐渐加重.③桃红四物液能降低缺血-再灌注损伤过程中TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子水平,降低炎症反应危害.④中剂量桃红四物液对缺血-再灌注损伤的治疗效果佳.
关键词： 肢体缺血-再灌注损伤 桃红四物液 骨骼肌 炎症因子 -
复灌Ⅰ号注射液对大鼠肢体缺血-再灌注损伤骨骼肌钙调蛋白表达的影响
目的:探讨复灌Ⅰ号注射液对大鼠肢体缺血-再灌注损伤骨骼肌钙调蛋白表达的影响.方法:54只SD大鼠随机分为3大组,分别为对照组(control组)、缺血-再灌注组(IR组)和复灌Ⅰ号药物干预组(Ⅰ-IR组).对照组所有大鼠不阻断血流；IR组和Ⅰ-IR组复制右后肢缺血-再灌注模型.对照组动物处死前不给药物,缺血-再灌注组于造成缺血前12h、造成缺血时和再灌注时于腹腔内各注射生理盐水1mL;复灌Ⅰ号药物干预组于造成缺血前12h、缺血时和再灌注时腹腔各注射复灌Ⅰ号注射液1mL.各组动物于再灌注0h、2h、4h、8h等时间点在右后肢相应区域切取约100mg腓肠肌,冰盐水快速洗去血液,滤纸吸干水份,剪碎制成组织匀浆,用于兰尼啶受体(ryanodine receptor,RyR1)和肌浆网钙泵(sarcoendo-plasmic reticulum Ca2+ -ATPase,SERCAl)的RT-PCR检测.结果:(1)骨骼肌型RyRl mRNA的RT PCR结果:Ⅰ-IR组在缺血2h时表达强,但要比IR组为弱,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01),8h时表达都降低,虽然Ⅰ-IR组降幅要比IR组为小,但其差异有统计学意义(P＜0.05).(2)SERCA1mRNA的RT-PCR结果:复灌Ⅰ号注射液干预各组的表达也随时间延长而减弱,但下降幅度较IR组为小,与IR组相比,除2h时外,在0h(P＜0.05)、4h(P＜0.01)、8h(P＜0,01)等时间点其差异均有统计学意义.结论:复灌Ⅰ号对缺血-再灌注损伤中骨骼肌的保护作用可能是通过双向调节RyR1以使早期减轻胞浆钙超载,后期保护细胞器的作用来实现的.这可能是其防治肢体缺血-再灌注损伤,减轻骨骼肌损伤的主要分子机制之一.
关键词： 肢体缺血-再灌注损伤 复灌Ⅰ号注射液 骨骼肌 钙调蛋白 -
复灌Ⅰ号注射液对大鼠肢体缺血——再灌注骨骼肌氧化损伤的保护机制
目的:探讨复灌Ⅰ号注射液对大鼠肢体缺血-再灌注骨骼肌氧化损伤的保护机制.方法:按文献[3]所报道的方法复制SD大鼠后肢缺血-再灌注模型.对照组动物不给药物;缺血再灌注组(IR组)于造成缺血前12 h、造成缺血时和再灌注时于腹腔内各注射生理盐水1 ml;复灌Ⅰ号药物干预组(Ⅰ-IR组)于造成缺血前12 h、缺血时和再灌注时腹腔各注射复灌Ⅰ号注射液1 ml.各组大鼠于相应时间点切取约1000 mg右侧腓肠肌中部肌肉,用于骨骼肌MDA、SOD、MPO的检测;切取左后肢腓肠肌行干湿重比值的检查;大鼠下腔静脉穿刺取血,取血清MDA、SOD、MPO、NO检测.结果:(1)MDA的检测结果:IR与Ⅰ-IR各组MDA含量均较对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05),且在8 h内随着时间的延长而逐渐增高.复灌Ⅰ号干预各组在相应时间点均较IR组低,各组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)SOD的检测结果:IR与Ⅰ-IR各组血清和骨骼肌SOD值均较对照组低,差异有统计学意义(P＜0.05),在8 h内其含量随时间的延长而逐渐降低.(3)MPO的检测结果:IR与Ⅰ-IR各组血清和骨骼肌MPO值均较对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05),在8 h内随时间的延长其含量逐渐升高,而Ⅰ-IR各组在相应时间点上均较IR组低,差异均有统计学意义(P＜0.05).(4)骨骼肌干湿重的检测结果:IR与Ⅰ-IR各组骨骼肌水肿明显,8 h内水肿逐渐增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).(5)血清NO的检测结果:在再灌注后2 h时高,8 h内随着时间的延长而逐渐下降,IR与Ⅰ-IR各组NO含量均较对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:复灌Ⅰ号注射液可减少氧自由基的产生、减轻SOD降低的程度、降低PMN的游出数量、降低血清中NO的含量、减轻组织水肿程度.
关键词： 复灌Ⅰ号注射液 肢体缺血-再灌注损伤 骨骼肌 治疗
