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糖尿病肾病 ETFβ表达变化与脂毒性关系研究
目的：通过检测 ETFβ在糖尿病肾病中的改变，探讨其与脂毒性的关系。方法体内实验采用腹腔注射链脲佐菌素合并单侧肾切除建立糖尿病肾病模型，并评价肾小管损伤情况，检测 ETFβ在肾皮质中的表达变化。体外建立脂肪酸诱导肾小管细胞 NRK 52E 凋亡模型，构建 ETFβ重组质粒，并将其转染至 NRK 52E 细胞，观察 ETFβ过表达对脂肪酸诱导细胞凋亡的作用。结果链脲佐菌素合并单侧肾切除诱导的糖尿病肾病大鼠模型中，肾小管明显损伤，ETFβmRNA 和蛋白表达均下降。脂肪酸可诱导 NRK 52E 细胞凋亡，过表达 ETFβ可减少凋亡。结论糖尿病肾病模型中 ETFβ表达下降，过表达 ETFβ可降低脂肪酸诱导的肾小管细胞凋亡。
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大鼠ETFβ基因过表达对NADPH氧化酶基因表达的影响
目的 构建大鼠ETFβ的重组质粒并检测其在人胚胎肾293T细胞中的表达和对NADPH氧化酶的影响.方法 应用RT-PCR方法从大鼠肾脏组织总RNA中扩增出编码ETFβ的cDNA,克隆至pUM-T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定后测序,测序正确后用磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,使用RT-PCR方法检测空载体组和重组质粒转染组的NADPH氧化酶各亚基mRNA水平的表达变化.结果 (1)测序结果证实PCR扩增得到编码ETFβ的cDNA序列正确;(2)磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,ETFβ融合蛋白成功表达;(3)RT-PCR结果显示重组质粒转染组的NADPH氧化酶5个亚基中的NOX3,NOX4的mRNA表达降低(P<0.05),空载体组和重组质粒转染组之间比较NOX1,NOX2,NOX5的mRNA表达差异无统计学意义.结论 成功构建大鼠ETFβ的重组质粒,该重组质粒可在HEK 293T中过表达,并且降低了NADPH氧化酶NOX3,NOX4的mRNA表达水平.
