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新型小鼠跨区供血耳瓣模型的构建
目的：建立一个实时活体观察血管形态学变化小鼠跨区供血耳瓣模型。方法体重25～30 g清洁级ICR小鼠30只，双耳脱毛后，观察其血管分布情况。小鼠麻醉后，用眼科剪从尾侧向头侧剪断鼠耳基底部尾侧2/3，保留头侧1/3，形成耳前血管蒂跨三个血管体、二个choke区的耳瓣模型。将小鼠侧卧置于二维图像采集系统的动物承载台上，调节体视显微镜物镜并固定为25倍，设置步进参数，“弓”型路线渐次、局部采集造模后0，1，2，3，5，7，10，14，21，30 d的时间点图像，合成鼠耳全景图。重点观察皮瓣的坏死率、皮瓣内choke血管的形态学变化。结果 ICR小鼠耳有三个恒定的血管体来供养，从内到外依次为头侧血管体、中间血管体及尾侧血管体。术后5 d，耳瓣坏死面积趋于稳定，坏死率为（15±7）％。内侧血管体与中间血管体之间的choke动静脉的管径出现快速扩增，两者都在第10天左右达大，choke静脉管径高峰可达到原来的（3.9±0.5）倍，choke动脉管径高峰可达到原来的（3.5±0.7）倍。10 d后，choke静脉管径开始减小，21 d后逐渐平稳，而choke动脉管径于术后10 d左右开始平稳，之后无明显减小。结论①跨区皮瓣切取后，静脉扩张是被动扩张，而动脉扩张是主动增值；②跨区皮瓣切取后血流动力学供区与潜力供区之间的choke区参与扩张的choke血管数量及扩张度均小于解剖供区与血流动力学供区之间的choke血管；③小鼠耳瓣模型为研究血管扩张机制及遴选促皮瓣存活药物的理想动物模型。
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局部注射肾上腺素对大鼠跨区皮瓣的延迟作用
背景:在修复大面积组织缺损或复杂畸形时,确保皮瓣移植成功的传统方法是进行旷日持久的延迟术,患者需承受高昂的医疗费用和2次以上的手术痛苫.目的:探索超大组织皮瓣延迟新方法以提高皮瓣延迟效率.设计、时间及地点:细胞形态学观察,于2007-09/2008-03存南华大学实验室完成.材料:健康雄性Wistar大鼠120只.取大鼠下背部皮瓣,5 cm×1 cm大小,跨越中线区2.5 cm,双侧主干血管在中线区有着恒定的吻合支.方法:将120只大鼠随机分为手术组、肾上腺素组和生理盐水组,40只,组,每组皮瓣又分成未延迟组,延迟3,7,14 h皮瓣组.手术组:取皮瓣后,彻底止血后原位缝合.肾上腺素组:以左侧髂支为蒂,在皮瓣右侧骼史附近注射1:400 000肾上腺素盐水O.1 mL至皮下,原位缝合.生理盐水组:操作同肾上腺素组,在相同部位注射生理盐水0.1 mL.主要观察指标:观察各组大鼠的皮瓣乳酸含量、皮瓣成活情况及皮瓣毛细血管的密度.结果:延迟7,14 d时,手术组皮瓣成活率高,肾上腺素组次之,生理盐水组低.手术组皮瓣自延迟3 d开始,皮瓣中线区血管密度开始增加,随着延迟时间的延长,乳酸浓度依次下降,皮瓣成活率依次升高.肾上腺素组乳酸含量在注射7,14 d后没有逐渐下降反而处于一个比较稳定的值.手术组和肾上腺素组的皮瓣成活率、毛细血管密度、乳酸含量与生理盐水组比较,均增高(P<0.05).结论:局部反复注射肾上腺素与手术方法起到相同的皮瓣延迟效果.
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胫后动脉穿支皮瓣修复足踝部皮肤软组织缺损
随着显微外科技术的发展及微创理念的深入,对机体损害较小的以胫后动脉穿支为蒂的小腿内侧皮瓣成为目前的研究热点,在基于梅劲、徐象党等人对小腿部皮穿支进行形态学分析及解剖学定位定量研究的理论基础上,笔者所在医院自 2008～2011 年应用胫后动脉穿支蒂链型供血跨区皮瓣修复胫前及足踝部皮肤软组织缺损 31 例,现报告如下.
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跨区皮瓣切取后choke血管管径的定量分析及MMP-2与MMP-9的表达
目的 探讨MMP-2与MMP-9在Choke血管演变过程中的表达情况.方法 SD大鼠40只,体重(310±10)g.在大鼠背部一侧切取髂腰动脉穿支为蒂,宽3 cm,长10 cm的皮瓣.术后将皮瓣分如5个时间点,在每个时间点切取髂腰动脉与肋间后动脉穿支之间的Choke区组织,利用Western blot、明胶酶谱法及免疫组化对MMP-2与MMP-9的表达情况进行分析.利用皮窗技术对Choke血管管径的变化进行定量分析. 结果 Westem blot结果检测表明皮瓣术后MMP-2、MMP-9的表达量均有所增高,MMP-9以术后1d增高为显著;明胶酶谱结果显示,术后MMP-9的活性明显增高,以术后1d增高为显著,而MMP-2的活性没有显著差异.MMP-2免疫阳性细胞主要表达在血管内皮,MMP-9主要表达在血管腔内及血管内皮.PGP9.5免疫组织化学显色,皮瓣切取后3d皮瓣内的轴突已经完全退变.结论 通过对皮瓣内血管演变过程进行定量分析,在形态学上验证了跨区皮瓣术后前3d静脉血“迷宫式回流”,之后主要通过轴型静脉进行回流的假说.在跨区皮瓣术后血管的形态学演变中MMP-9可能扮演比MMP-2更重要的角色.
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神经生长因子对大鼠跨区穿支皮瓣成活的影响
目的 评价神经生长因子(NGF)对SD大鼠背部跨区穿支皮瓣成活的影响.方法 成年SD大鼠60只,平均分为实验组和对照组.切取面积约3cm×10cm的背部跨区皮瓣.实验组皮下注射NGF溶液(10 nmol·ml-1·kg-1);对照组同法注射0.1 mol/l磷酸盐缓冲溶液(1 ml/kg).术后第3、7天局部取材运用Western Blot技术半定量检测VEGF及CD34蛋白含量;显微CT微血管三维重建,析因设计分析血管容积及总长度的形态学变化.后术第7天统计皮瓣存活面积,免疫组化染色观测血管生长因子受体(KDR)及NGF受体(TrkA)的表达.结果 第3天,VEGF表达实验组与对照组无显著统计学差异(P=0.088);实验组CD34表达明显高于对照组(P=0.004);第7天,两种蛋白分子表达,实验组显著均优于对照组(P<0.05).血管形态学分析示NGF和时间因相互作用增加血管容积(F=33.304,P<0.05)及总长度(F=8.493,P=0.01);实验组皮瓣成活面积明显大于对照组(P<0.05).免疫组化染色示实验组KDR阳性表达较为明显.结论 NGF可促进跨区供血穿支皮瓣的成活.
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尾静脉注射DMOG对大鼠跨区皮瓣choke血管区的影响
目的 探讨尾静脉注射二甲氧乙二酰甘氨酸(DMOG)对大鼠背部跨区皮瓣血管体吻合区(choke 血管区)微循环以及皮瓣成活率的影响. 方法 2015年2月至2015年9月,将40只SD大鼠随机分成DMOG实验组和生理盐水对照组,在背部右侧,切取以髂腰动脉为蒂,其远端跨越肋间后动脉,延伸至胸背动脉体区,制备9 cm×3 cm跨区皮瓣.实验组于皮瓣切取前1d、术后即刻、术后1、2、3d尾静脉注射DMOG 40 mg/kg,对照组于相同时间点尾静脉注射等量的生理盐水.①Choke区术后1、3、7d取材,HE染色,光镜下观察同一部位动、静脉管径形态,并计算两组管径大小改变的相对值.②术后7d,Western blot检测皮肤相关蛋白PCNA和HIF-1α表达水平;ELISA检测皮肤PCNA、HIF-1α、SDF-1α和VEGF含量.③术后7d处死大鼠,统计皮瓣成活率以及血管造影观察皮瓣微血管形态. 结果 ①实验组、对照组皮瓣术后7d的成活率分别为(96.3±5.1)％和(73.9±5.8)％,实验组显著高于对照组(t=6.528,P＜ 0.05).②X线显示实验组髂腰动脉明显比对照组增粗增长,与术前相比,实验组和对照组于术后1、3、7d时动、静脉管径逐渐扩大:术后1d,实验组和对照组管径扩大倍数为1.40±0.01和1.27±0.15,差异无统计学意义(P＞0.05);术后3d,实验组和对照组管径扩大倍数为2.20±0.26和1.50±0.20,差异有统计学意义(t=3.656,P＜ 0.05);术后7d,实验组和对照组管径扩大倍数为3.67±0.35和2.03±0.15,差异有统计学意义(t=7.387,P＜0.05).③术后7d,实验组皮肤PCNA、HIF-1α表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).④术后第7天,实验组和对照组皮肤PCNA的蛋白含量为(8.95±0.71)ng/mg和(4.15±0.72)ng/mg,HIF-1α的蛋白含量为(5.04±0.50) ng/mg和(2.98±0.29)ng/mg,SDF-1α的蛋白含量(2.91±0.61)ng/mg和(1.39±0.62)ng/mg,VEGF的蛋白含量为(2.17±0.41)ng/mg和(0.95±0.44)ng/mg,实验组均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 尾静脉注射DMOG通过改善皮瓣穿支血管体choke区微循环,减轻皮瓣缺血、缺氧的损伤,从而提高皮瓣成活率.
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大鼠跨区穿支皮瓣模型及实验研究现状
自1989年Koshima[1]早提出穿支皮瓣的概念以来,穿支皮瓣因其对供区损伤小、对受区修复重建效果好的特点,已被显微外科等广泛应用于临床.然而对于较大面积的皮肤缺损,单血管体皮瓣往往不能安全有效地覆盖创面,而要切取面积更大的跨区供血皮瓣来解决这个问题.
