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下调人质膜型唾液酸酶对前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭能力的影响及其机制
目的 探讨人质膜型唾液酸酶(Neu3)表达降低对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响.方法 构建pGCsi-Neu3质粒,从GeneBank中寻找符合Neu3 mRNA特异的靶序列,合成siRNA模板链后与载体相连接,转入感受态细胞,测序鉴定.应用真核细胞转染技术转染前列腺癌PC-3细胞,利用荧光显微镜检测转染效率;细胞增殖实验检测pGCsi-Neu3质粒对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡的改变;Transwell迁移、侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的变化.结果 针对Neu3基因设计了siRNA序列并成功构建pGCsi-Neu3质粒,pGCsi-Neu3-3质粒对基因Neu3的抑制为有效.与对照组比较,pGCsi-Neu3-3质粒可有效抑制肿瘤细胞增殖(P＜0.01);pGCsi-Neu3-3质粒可引起前列腺癌PC-3细胞凋亡,凋亡率明显高于空白对照组(MOCK组),差异有统计学意义(P＜0.05);pGCsi-Neu3-3质粒可使前列腺癌PC-3细胞增殖细胞核抗原表达明显下降;pGCsi-Neu3-3质粒可抑制前列腺癌PC-3细胞迁移、侵袭能力,且与对照组比较,差异有高度统计学意义(P＜0.01).结论 针对Neu3基因siRNA表达质粒的构建、鉴定和初始研究,为Neu3对前列腺癌细胞生长、转移发挥作用机制的研究奠定实验基础.
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人质膜型唾液酸酶(hmSD)在前列腺癌细胞系(PC-3)中的表达
目的:构建高表达hmSD的前列腺癌PC-3细胞系.方法:从人睾丸组织钓取hmSD基因并克隆至含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的表达载体,转染前列腺癌PC-3细胞系后利用荧光显微镜观察并测定hmSD活性.结果:获得高表达hmSD的前列腺癌PC-3细胞系.结论:该实验为进一步研究hmSD与前列腺癌的关系奠定基础.
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质膜型唾液酸酶对前列腺癌荷瘤小鼠恶病质影响的研究
目的:观察质膜型唾液酸酶(human plasma membrane-associated sialidase,Neu3)对前列腺癌荷瘤小鼠恶病质的影响.方法:应用真核细胞转染技术,转染前列腺癌PC-3、LNCaP细胞.转染后,利用倒置显微镜观察细胞形态变化;利用MTT实验观察细胞增殖变化;划痕实验观察细胞迁移能力的变化.通过显微外科手术建立原位肿瘤模型,随机分为4组,Mock组、AS组、pGCsi-Scramble组及pGCsi-Neu3组,每组6只小鼠,利用减毒沙门氏菌作为运载体,监测Neu3对裸鼠进食量、体重等恶病质指标的影响;利用IL-6小鼠ELISA试剂盒检测小鼠血清IL-6.结果:PC-3细胞和LNCaP细胞转染pGCsi-Neu3质粒后细胞透光性下降,伪足减少,细胞增殖能力下降,迁移能力下降,与Mock组及pGCsi-Scramble组相比,有统计学意义(P<0.01).动态监测前列腺癌荷瘤小鼠体重和摄食量数据显示:Mock组、AS组和pGCsi-Scramble组,小鼠体重逐渐减轻,摄食量减小,试验结束时,与pGCsi-Neu3组相比体重、摄食量差异明显,有统计学意义(P<0.01).pGCsi-Neu3组小鼠血清IL-6水平明显低于Mock组、AS组和pGCsi-Scramble组,有统计学意义(P<0.01).结论:下调Neu3表达,在体内具有良好的延缓恶病质发生、发展作用,其可能机制是Neu3的表达水平下降抑制了前列腺癌PC-3、LNCaP细胞增殖和迁移,IL-6表达下降,食欲增加.Neu3可能成为治疗癌性恶病质新靶点.
