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α-烯醇化酶在肿瘤研究中的进展
肿瘤在形成和发展过程中涉及多种与能量代谢有关的蛋白，这些蛋白可能提供促进肿瘤生长的正向环境，也可能参与对肿瘤抵抗和清除的防御反应。α-烯醇化酶（ ENO1）作为一种多功能的蛋白，参与多种生理及病理过程，与肿瘤的发生、发展相关。研究发现，ENO1在头颈部肿瘤、呼吸系统肿瘤、消化系统肿瘤、妇科肿瘤及其他相关肿瘤中均有不同程度的表达。因此，ENO1可能成为预测某些肿瘤发生、发展、疗效及预后的辅助指标。
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人 ENO1基因的克隆及其重组逆病毒载体ENO1-pBABE-Puro 的构建
目的：构建含人烯醇化酶1（ENO1）目的基因的重组逆转录病毒载体。方法从人癌细胞中提取总RNA合成cDNA， PCR扩增目的基因ENO1，用sal1和BamH1双酶切ENO1及pbabe质粒，然后用连接酶将ENO1插入pbabe中，后将重组质粒转化感受态E．coli DH 5α大肠杆菌，提取质粒进行酶切鉴定及 DNA 测序。结果重组逆转录病毒载体ENO1-pBABE-Puro测序结果与GenBank上的序列完全一致，克隆的目的基因已经正确插入到逆转录病毒载体pB-ABE-Puro中。结论成功构建了含有ENO1目的基因的重组逆转录病毒载体，为进一步观察ENO1在肿瘤发生、发展中的作用及与宫颈癌细胞化疗敏感性的相关性做好准备。
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α-烯醇酶对胃癌细胞株MGC-803上皮间质转化的影响
目的 研究α-烯醇酶(α-enolase, ENO1)对MGC-803胃癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的作用.方法 扩增 ENO1 基因编码区序列,构建真核表达载体 pcDNA3.1/ENO1并测序;脂质体转染胃癌细胞,以pcDNA3.1/ENO1 质粒转染细胞为ENO1 组,以空质粒pcDNA3.1 转染细胞为对照组,Real-time PCR和Western Blot分别检测各组ENO1的mRNA及蛋白表达情况;在转染24 h收集两组细胞,Real-time PCR检测并比较EMT特异标志基因E-cadherin、Snail及Vimentin表达水平;合成特异干扰ENO1的siRNA片段,脂质体转染癌细胞,在转染24 h收集干扰组和对照组细胞,Real-time PCR检测EMT特异基因表达水平.结果 Real-time PCR结果显示,ENO1组ENO1 mRNA相对表达量高于对照组(P＜0.05);Western Blot发现,ENO1组ENO1蛋白相对表达量也高于对照组(P＜0.05).结果发现转染24 h后ENO1组E-cadherin、Snail及Vimentin等基因的表达水平与对照组相比差异无统计学意义( P＞0.05);转染24 h后干扰组E-cadherin、Snail 及 Vimentin 等基因的表达水平与对照组相比差异无统计学意义( P ＞0.05).结论 在胃癌细胞内过表达及干扰ENO1表达,对细胞EMT并无明显作用,ENO1对胃癌细胞功能的影响可能与EMT无关.
