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软骨调节素Ⅰ的研究进展
软骨调节素Ⅰ(ChM-Ⅰ)是软骨调节素家族中效应强的一种软骨特异性生长因子,早期对ChM-Ⅰ的研究主要集中在软骨组织,之后研究显示在其他的无血管组织,如眼、心脏瓣膜、椎间盘中也存在ChM-Ⅰ的表达.由于ChM-Ⅰ具有抑制血管生长的特性,很多以血管异常生长为主要表现的疾病会出现ChM-Ⅰ的表达变化,提示其参与了众多疾病的发生和发展过程.在体外环境下,ChM-Ⅰ可抑制血管内皮细胞DNA合成和管状结构的形成,提示ChM-Ⅰ作为一种血管生长抑制因子以及软骨细胞生长刺激因子,参与了软骨的生长、发育以及成熟、老化的过程.
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软骨调节素Ⅰ和结缔组织生长因子蛋白在骨髓间充质干细胞和软骨细胞中的差异表达
背景:骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化起促进作用的除转化生长因子、成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白、胰岛素样生长因子基因在软骨细胞中高表达外,软骨调节素Ⅰ和结缔组织生长因子在软骨细胞中的高表达可能在软骨形成过程中发挥重要作用.目的:以Western blot检测软骨调节素Ⅰ和结缔组织生长因子在大鼠骨髓间充质干细胞、透明软骨细胞及弹性软骨细胞中的差异表达.设计、时间及地点:以细胞为对象的对比观察性实验,于2007-10/2008-04在大连医科大学附属第一医院中心实验室,大连医科大学生物实验室完成.材料:2月龄SD大鼠,雌雄不限.方法:以密度梯度离心法和贴壁培养法提取SD大鼠骨髓间充质干细胞,酶消化法提取肋软骨透明软骨细胞和耳廓弹性软骨细胞,分别培养二三代后提取细胞总蛋白,Western blot检测骨髓间充质干细胞、透明软骨细胞及弹性软骨细胞中软骨调节素Ⅰ和结缔组织生长因子蛋白水平表达,并进行定量分析.主要观察指标:软骨调节素Ⅰ和结缔组织生长因子蛋白水平.结果:透明软骨细胞、弹性软骨细胞中软骨调节素Ⅰ蛋白表达明显高于骨髓间充质干细胞(P<0.05),透明软骨细胞和弹性软骨细胞中软骨调节素Ⅰ蛋白的表达差异无显著性意义(P>0.05).透明软骨细胞、弹性软骨细胞中结缔组织生长因子蛋白的表达明显低于骨髓间充质干细胞(P<0.05),透明软骨细胞和弹性软骨细胞中结缔组织生长因子蛋白的表达差异无显著性意义(P>0.05).结论:透明软骨细胞和弹性软骨细胞中高表达软骨调节素Ⅰ蛋白,骨髓间充质干细胞高表达结缔组织生长因子蛋白,说明软骨调节素Ⅰ可能在成熟的软骨细胞中发挥着重要作用,提示其可作为定向诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的重要备选生物因子.
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骨髓间充质干细胞中软骨调节素Ⅰ的稳定上调表达
背景：软骨调节素Ⅰ是一种糖蛋白，主要在软骨中表达，而在骨髓间充质干细胞中少量表达。结合课题组的前期研究，推断软骨调节素Ⅰ在诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化过程中可能会起促进作用。
目的：构建软骨调节素Ⅰ表达载体，使其在大鼠骨髓间充质干细胞中稳定上调表达。
方法：在大鼠软骨组织中获取软骨调节素Ⅰ目的基因，使用 pcDNA3.1(+)质粒表达载体构建pcDNA3.1(+)/ChM-I 表达载体。密度梯度离心法和贴壁培养法获得大鼠骨髓间充质干细胞。用脂质体法将构建的pcDNA3.1(+)/ChM-I表达载体转染大鼠骨髓间充质干细胞，使用G418稳定筛选转染细胞，用RT-PCR 及Western blot 检测软骨调节素Ⅰ在细胞株内的表达。
结果与结论：对阳性克隆的双酶切鉴定及测序和分析对比，结果显示与软骨调节素Ⅰ基因长度相符并且序列无误，且读码框正确。RT-PCR及western blot检测结果显示，软骨调节素Ⅰ的mRNA及蛋白在骨髓间充质干细胞中稳定的高表达。实验成功构建了pcDNA3.1(+)/ChM-I表达载体，并成功将其转染到大鼠骨髓间充质干细胞中，终使软骨调节素Ⅰ在大鼠骨髓间充质干细胞中稳定上调表达。
