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一种新的T细胞相关分子IBP表达水平定量检测方法的建立
目的 建立一种定量检测IBP表达水平的方法 ,为研究IBP在免疫细胞分化以及在免疫性疾病当中的作用奠定基础.方法 利用反转录PCR和PCR技术获得目的 基因和内参基因片段,构建重组质粒,以重组质粒为标准品,建立实时PCR标准曲线;测定外周血白细胞IBP和β-actin表达水平.以β-actin为内参照,均一化检测结果 .结果 重组质粒的阳性克隆经PCR扩增,0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定,目的 基因片段插入载体内;建立起实时PCR标准曲线.检测20例正常人全血标本,得到比较稳定的检测结果 .结论 成功建立了用实时PCR定量检测IBP mRNA表达水平方法 ,为进一步研究IBP奠定了基础.
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大蒜新素降低鼠巨细胞病毒播散性感染小鼠病毒DNA载量研究
目的 用大蒜新素治疗鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus, MCMV)播散性感染小鼠至慢性期,检测小鼠唾液腺、肝、脾和肾组织内MCMV DNA载量动态变化,在整体水平上观察大蒜新素抗MCMV的长期疗效.方法 BALB/c幼鼠60只,腹腔接种MCMV Smith株建立MCMV播散性感染模型,随机分为大蒜新素治疗组和模拟治疗组各30只,接种病毒后24 h,两组分别腹腔注射大蒜新素25 mg·kg-1·d-1和0.9%氯化钠注射液0.2 mL,qd,共120 d.于治疗后1,3,7,14,28,45,60,75,90和120 d,每组随机选择小鼠3只,取唾液腺、肝、脾和肾组织,采用real time PCR法检测组织内MCMV DNA载量.结果 模拟治疗组小鼠唾液腺内MCMV DNA载量高,在治疗后14 d(感染后15 d)达高峰;肝、脾和肾内病毒DNA载量治疗后7 d达峰值;治疗28 d(感染29 d)后,各组织内病毒DNA载量明显减少,尤其是肝、脾和肾组织病毒DNA呈持续低水平(进入慢性期).与模拟治疗组比较,大蒜新素治疗组治疗后7,14和28 d唾液腺、脾和肾内MCMV DNA 载量显著降低;治疗后7和14 d肝内病毒DNA载量明显降低.进入慢性期后,两组小鼠各脏器病毒DNA载量差异无显著性.结论 大蒜新素长期治疗不能完全清除CMV,但在急性感染期(病毒增殖高峰期)能显著降低脏器内病毒DNA载量.
