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脂多糖对干燥综合征患者唇腺上皮细胞表达TLR4及CD14的影响
目的 探讨LPS-TLR4-CD14信号传导通路在干燥综合征(sjogren's syndrome,SS)发病机制中的作用.方法 选择解放军第285医院风湿科2015年3月-2016年3月收治SS患者7例为研究组;另5例排除SS诊断,且无其他疾病的作为对照组.①取患者唇腺组织进行体外培养,一周后采用抗细胞角蛋白19的单克隆抗体PAP法对新生细胞和唇腺组织细胞进行染色,以鉴定新生细胞来源.②分别于培养成功的新生细胞PSS组和对照组加入浓度为1 μg/ml的内毒素(lipopolysaccharide,LPS),在继续培养后1、8、12、24、48、72 h时间点提取细胞总RNA,采用RT-PCR法分别检测不同时间点TLR4、CD14 mRNA的表达.③对新生细胞pSS组分别加入浓度为1、10、100、103、104、105 ng/ml的LPS,对照组不加LPS,继续培养24 h后分别检测TLR4和CD14 mRNA表达.结果 ①结果显示新生细胞和唇腺组织中导管上皮细胞染色为阳性反应,唇腺组织中的淋巴细胞、腺泡细胞呈阴性反应,证明本次培养的新生细胞来源于唇腺组织的导管上皮细胞.②在新生细胞中加入LPS,作用1h后TLR4和CD14 mRNA表达增强,分别于8、12 h后达高峰期,作用72 h后明显下降.③浓度为1 ng/ml的LPS即可引起PSS组新生细胞TLR4和CD14 mRNA表达显著增高,随着LPS浓度的增高,TLR4和CD14 mRNA表达持续升高,当LPS浓度达到104 ng/ml以上时,TLR4和CD14 mRNA表达呈平台期,变化不显著.结论 经LPS刺激后,唇腺导管上皮细胞高表达TLR4和CD14 mRNA,且反应在一定范围内呈时间、浓度依赖性,由此推断LPS-TLR4-CD14信号转导通路参与了SS的发病机制,进而揭示感染与SS发病有关.
