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几种实验动物皮肤病原真菌及疾病
真菌在自然界中分布广泛、种类众多,目前已发现的多达10万种以上,大多数真菌是无害的,仅极少数(一百多种)对人及动物有致病作用.随着微生物学、流行病学的不断发展,致病性真菌的问题已被日益重视.致病性真菌包括浅部真菌和深部真菌[1],目前在实验动物中危害较大的是浅部的皮肤病原真菌,它主要引起人兽共患的皮肤病[2].实验动物若患有皮肤病原真菌病,不仅影响科学实验的准确性,更威胁着动物群体和实验工作者的健康.因此必须加强对实验动物皮肤病原真菌病的了解和认识.
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PCR方法检测实验动物皮肤病原真菌
目的 对用于实验动物皮肤病原真菌检测的分子生物学方法即皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR(任意引物聚合酶链式反应)相结合技术的特异性及敏感性进行评价,并通过建立动物模型及实际的皮肤真菌检测来验证此方法的可行性.方法 特异性测定:用皮肤病原真菌通用引物进行PCR,扩增大肠杆菌DNA、犬肝炎病毒DNA及小鼠肝癌H22细胞DNA.敏感性测定:以紫外分光光度法测定DNA质量浓度,根据测定值将DNA进行10倍系列质量浓度稀释,得到100 ng～10 fg的8个质量浓度,然后对其进行PCR扩增.建立实验动物皮肤病原真菌感染的动物模型.用皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR相结合技术检测从动物模型及河北省各地的实验动物单位采集的动物皮肤标本.结果 用皮肤病原真菌通用引物扩增实验动物三种皮肤病原真菌标准菌株,均扩增出大小为440 bp的条带,而大肠杆菌、犬肝炎病毒、小鼠肝癌H22细胞均未扩增出条带.皮肤病原真菌通用引物PCR敏感性测定,模板DNA 100 ng～100 fg的7个系列浓度均扩增出了阳性条带,10 fg为阴性.建立了实验动物皮肤病原真菌感染的动物模型.对河北省各地的实验动物皮肤真菌检测过程中出现一例通用引物阳性标本.结论 皮肤病原真菌通用引物(CHS1 1S,CHS1 1R)具有较强的特异性,敏感度为100 fg;将皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR技术相结合可用于检测实验动物皮肤病原真菌.
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实验动物皮肤病原真菌检测方法的改良
目的 对实验动物皮肤病原真菌2种培养方法进行了比较.方法 将采集到的3只皮肤真菌感染病兔样品经由沙氏平皿法和沙氏试管斜面培养法分别进行培养.结果 在3只真菌感染病兔中应用试管斜面法我们只检测到1例皮肤病原真菌阳性,而采用沙氏平皿法3例阳性全部检出.结论 结合临床检测经验,我们认为本研究的沙氏平皿法优于沙氏试管斜面法,在实验动物皮肤病原真菌常规检测中具有推广应用价值.
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实验动物皮肤病原真菌多重 PCR 检测方法的建立与初步应用
目的：建立石膏样毛癣菌（Tm）、石膏样小孢子菌（Mg）、犬小孢子菌（Mc）和猴类毛癣菌（Am）的多重PCR检测方法，用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S－28S rRNA序列设计特异性引物，通过引物、dNTP、TaqDNA聚合酶浓度及退火温度和时间的优化，建立四种皮肤病原真菌的多重PCR体系。经特异性和敏感性检验后，对15份人工感染真菌大鼠毛和260份实验动物毛发样本进行检测。结果所建多重PCR方法能够有效区分四种皮肤病原真菌，产生192 bp（ Tm）、460 bp（ Mg）、290 bp（ Mc）和602 bp（ As）的目的片段，低检测限分别为5．9 pg／μL、6．6 pg／μL、9．5 pg／μL和5．1 pg／μL。被检的15份人工感染样本扩增结果准确，260份毛发样本中未检测出四种真菌。结论所建立的多重PCR方法能够同时对实验动物中的四种皮肤病原真菌进行快速的检测，具有较高的应用价值。
