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脂蛋白酯酶基因敲除小鼠的繁育
目的摸清脂蛋白酯酶基因敲除小鼠的繁殖规律,建立可靠的检测方法.方法采用杂交、回交、互交的方法进行培育;采用从LPL(-/-)基因敲除小鼠的个体组织(鼠尾)中提取基因组DNA进行PCR分析,对其LPL(-/-)基因型作出鉴定.结果繁育出脂蛋白酯酶基因敲除小鼠新品系,并建立了可靠的繁殖方法和检测方法.结论建立了脂蛋白酯酶基因敲除小鼠动物模型.
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精子发生过程中cyclin A1、Atm和p53之间在遗传学中相互作用的分析
目的:分析在精子发生和DNA双链断裂修复过程中p53、Atm与Cyclin A1之间功能的相互作用.方法:建立两个双敲除小鼠品系.在Cyclin A1(Ccna1);p53-和Ccna1;Atm-双敲除小鼠中分析精子发生和双链断裂修复机制.结果:在CyclinA1-/-(Ccna1-/-)小鼠的睾丸中发现精子发生过程停止在双线期中期,并与多核巨型细胞相关.我们用磷酸化的H2AX通过免疫组化分析发现Ccna1缺失的睾丸特别是巨细胞中聚集了未修复的DNA双链断裂.此外,巨型细胞不再发生调亡.巨型细胞出现在减数分裂前期Ⅰ,由于睾丸中缺少被认为能将精子发生阻断在前期Ⅰ之前的ATM,因此在缺少Cyclin A1的情况下不能形成巨型细胞.Cyclin A1与p53相互作用,磷酸化的p53与CDK2形成复合物.有趣的是在Ccna1-缺失的小鼠中p53-缺失能显著地提高巨型细胞的数量.在突变的睾丸中一系列DNA修复相关的基因的表达分析显示在CyclinA1缺失的情况下没有一个基因会始终进行错误的调控.结论:精子发生过程中Ccna1-缺失与DNA双链断裂修复的缺陷有关.p53的缺失能够加强这一现象.
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5-羟色胺转运体敲除小鼠在应激下焦虑行为和HPA轴的改变
目的 研究5-羟色胺转运体( serotonin transporter,SERT)敲除小鼠焦虑行为及ACTH和皮质酮分泌变化.方法 将基因型为SERT+/-的雌雄小鼠交配产子,并把鉴定后子代小鼠按基因型(SERT+/+、SERT+/-、SERT -)分为对照组和EPM组,每组15只.利用高架十字迷宫作为应激原刺激小鼠,观察各组小鼠的焦虑行为,并测定各组小鼠的ACTH和皮质酮分泌.结果 ①基因型PCR成功鉴定SERT+/+、SERT+/-和SERT-/-的小鼠.②SERT+/-和SERT - -小鼠的开臂停留时间、开臂停留时间百分比、进入开臂的次数和进入开臂的次数百分比较SERT+/+均显著降低(P＜0.05,P＜0.01).③EPM刺激下,SERT+/-和SERT-/-小鼠ACTH分泌的增加显著高于SERT+/+(P＜0.05),SERT-/-小鼠皮质酮分泌的增加显著高于SERT+/+ (P ＜0.05).结论 SERT敲除小鼠在应激条件下易产生焦虑,并且ACTH和皮质酮分泌显著升高.
