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滑膜间质干细胞文献资料
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腺病毒介导BMP-4转染兔SMSCs软骨分化研究
目的 研究腺病毒介导BMP-4并带有绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染兔滑膜间充质干细胞(SMSCs)向软骨细胞分化的可行性.方法 兔膝关节腔取材,用I型胶原酶消化分离获取SMSCs,采用流式细胞技术检测表面标记物.构建包含BMP-4基因和EGFP基因的腺病毒载体(Ad-BMP-4)并包装病毒.用不同感染复数(MOI分别为50、100、200、300、400、500)的病毒感染SMSCs,观察各组转染效率及检测不同MOI条件下细胞生长曲线,确定合适的病毒感染滴度.进而应用ELISA检测分析染后的SMSCs是否进入软骨细胞分化谱系.结果 经分离纯化后获取的SMSCs形态学表现出间充质干细胞应有的结构,表面标记蛋白CD44、CD90高度表达,但CD34、CD45基本不表达,符合SMSCs的特征.分别以50、100、200、300、400、500MOI感染后,感染效率分别为54.3％、72.2％、77.8％、85％、86.6％、89.3％,而且感染效率依赖MOI高低,结合生长曲线300MOI为佳感染滴度.ELISA法检测发现BMP-4显著高表达,同时软骨基因相关蛋白SOX9、COLⅡ及AGC蛋白也高表达.结论 应用300MOI重组腺病毒感染兔SMSCs细胞,能维持细胞正常增殖水平,且能快速高效地表达BMP-4并激活其他软骨相关基因,可促使SMSCs向软骨细胞分化.
