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pGL3-EPO-α-MHC启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及缺氧调控功能考察
目的 考察EPO-α-MHC启动子在缺氧条件下的调控表达作用.方法 构建pGL3-EPO-α-MHC启动子编码荧光素酶报告基因的质粒,以含pGL3-EPO-α-MHC和pGL3-CMV启动子的质粒分别转染缺氧和常氧的心肌细胞(H9C2),检测荧光素酶的表达.结果 pGL3-CMV启动子质粒在缺氧条件下的报告基因表达与常氧条件相比显著下降(P < 0.05),而pGL3-EPO-α-MHC启动子在缺氧条件下能够显著上调报告基因的表达4.3倍(P < 0.01).结论 EPO-α-MHC启动子具有缺氧调控功能.
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氯化钴缺氧处理对大鼠星形胶质细胞TFPI-2表达的影响
[目的]探讨氯化钴缺氧对大鼠星型胶质细胞TFPI-2基因表达的影响及其可能的调节机制.[方法]将大鼠星型胶质细胞分为对照组、化学缺氧组(加入终浓度为100 μmol/L氯化钴培养24 h).显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞活性,RT-PCR法检测各组缺氧诱导因子-1α(hypoxia induced factor,HIF-1α)、组织因子途径抑制因子-2 (tissue factor pathway inhibitor 2,TFPI-2)mRNA表达水平变化,Western blotting检测缺氧前后HIF-1α、TFPI-2、VEGF蛋白表达水平变化.[结果]MTT检测显示,氯化钴缺氧会降低细胞活性,且呈时间依赖性.在显微镜下可观察到细胞缺氧后胞体变小,突触缩短.氯化钴缺氧处理组细胞TFPI-2 mRNA水平显著高于对照组(P＜0.05).Western blotting显示与对照组相比,缺氧后细胞内HIF-1α、TFPI-2、VEGF蛋白表达水平均有显著升高(P＜0.05).[结论]氯化钴缺氧可以激活HIF-1/VEGF缺氧通路,增加SH-SY5Y细胞TFPI-2 mRNA和蛋白表达水平.
关键词： 缺氧诱导因子-1α 氯化钴 大鼠星型胶质细胞 组织因子途径抑制物-2 缺氧调控
