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香加皮宝藿苷-I对人食管癌细胞Eca-109侵袭力的影响
目的 探索宝藿苷-I对人食管癌细胞Eca-109侵袭力及TFPI-2基因表达的影响.方法 以12.5、25、50μg/ml浓度的宝藿苷-I处理Eca-109细胞48h,分别采用Transwell小室法检测细胞的侵袭能力、RT-PCR法检测细胞TFPI-2 mRNA表达水平以及Western blot法检测TFPI-2蛋白表达水平等.结果 12.5、25、50μg/ml宝藿苷-I均可抑制人食管癌细胞Eca-109的侵袭力并能上调TFPI-2 mRNA及蛋白的表达,25、50μg/ml组与对照组相比均有显著差异(P<0.05).结论 宝藿苷-I能抑制人食管癌细胞Eca-109的侵袭力,可能与上调TFPI-2基因的表达有关.
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宝藿苷-Ⅰ对人食管癌细胞Eca-109增殖及细胞周期的影响
目的 研究香加皮中宝藿苷-Ⅰ对人食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响及其作用机制.方法 采用MTT法分析不同质量浓度宝藿苷-Ⅰ(12.5、25、50 μg/mL)分别作用24、48、72 h后,对Eca-109细胞增殖的影响;流式细胞术分析宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞周期的影响;RT-PCR技术检测宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞Cyclin B1mRNA表达的影响;Western blotting方法检测宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞Cyclin B1蛋白表达的影响.结果 25、50μg/mL宝藿苷-Ⅰ均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(P<0.05),作用48 h的IC50为24.8μg/mL.25、50μg/mL宝藿苷-Ⅰ作用48 h后,随宝藿苷-Ⅰ质量浓度的增加,Eca-109细胞的G0/G1期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显提高,细胞的Cyclin B1蛋白及mRNA表达水平降低,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01).结论 香加皮宝藿苷-Ⅰ可抑制Eca-109细胞增殖,使细胞周期阻滞,该作用町能与下调细胞Cyclin B1表达有关.
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宝藿苷-Ⅰ联合As2O3对食管癌Eca-109细胞增殖的影响
目的 研究宝藿苷-Ⅰ与As2O3联合应用对食管癌细胞Eca-109增殖的影响.方法 取对数生长期Eca-109接种于96孔培养板,宝藿苷-Ⅰ组予以25 mg/L宝霍苷As2O3组予0.18mg/L As2O3,联合用药组予12.5 mg/L宝藿苷-Ⅰ+0.09 mg/L As2O3,对照组予0.1% DMSO.采用MTT法分析对Eca-109细胞增殖的抑制作用,DNA琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期,Western Blot技术检测C-myc基因蛋白的表达,每组均重复3次.结果 3个用药组均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(均P<0.05),但联合用药组抑制作用显著优于单独用药组(P<0.05);3个用药组均可使细胞凋亡,使细胞周期阻滞在G2/M期,使C-myc表达下调,与对照组相比均有显著性差异(P均<0.05),但联合用药组较单药组作用更显著(P<0.05).结论 各自半量的宝藿苷-Ⅰ与As2O3联合应用对Eca-109细胞的增殖抑制有显著的增强作用,明显优于各自的单味应用效果.
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HPLC法同时测定淫羊藿-川芎药对8种化学成分的含量
目的:建立补肾活血药对淫羊藿-川芎中淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷-Ⅰ、川芎嗪、阿魏酸和藁本内酯8种成分的HPLC含量测定方法,明确配伍对8种成分含量变化的影响.方法:采用RP-HPLC多波长切换梯度洗脱技术.色谱柱:Waters X Bridge-C18 (4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-1％醋酸梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-;分别以各成分大吸收波长为检测波长;柱温:30℃.结果:淫羊藿-川芎药对中淫羊藿苷、川芎嗪、阿魏酸等8成分均呈良好的线性关系(r≥0.999);平均加样回收率(n=6)为97.7％～103.8％ (RSD ＜3％,n=6).淫羊藿、川芎配伍后川芎嗪、阿魏酸、藁本内酯的含量分别由0.714、2.701、12.930 mg ·g-1变成1.492、3.032、13.97 mg·g-1,含量显著增加,而淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和宝藿苷-Ⅰ的含量分别由5.190、1.762、2.423、1.965、0.712 mg·g-1变成5.475、1.645、2.440、2.035、0.729 mg·g-1,含量则无明显变化.结论:该方法简便快速,结果准确可靠,方法重复性好,可用于淫羊藿-川芎药对及其制剂的质量控制,并为淫羊藿、川芎的临床配伍应用及其研究提供科学依据.
